[发明专利]一种无细胞表达信号蛋白的方法及表达系统

摘要

本发明涉及一种无细胞表达信号蛋白的方法及系统，所述方法包括：将信号蛋白目标基因连接到pIX3.0载体上，获得表达质粒；采用S30缓冲液提取大肠杆菌，得到大肠杆菌抽提物，所述大肠杆菌菌种为Rosetta(DE3)；配制能量供应体系，所述能量供应体系包括丙酮酸(PEP)/丙酮酸激酶(PK)、磷酸肌酸(CP)/肌酸激酶(CK)以及葡萄糖；配制氨基酸混合物及盐溶液；采用超临界法制备卵磷脂/胆固醇脂质体；将所述表达质粒加入到包括大肠杆菌抽提物、能量供应体系、氨基酸混合物、盐溶液以及卵磷脂/胆固醇脂质体的无细胞蛋白表达系统中进行表达。本发明能解决信号蛋白表达量低的问题。

主权项

1.一种无细胞表达信号蛋白的方法，其特征在于：所述方法包括：/n将信号蛋白目标基因连接到pIX3.0载体上，获得表达质粒；/n采用S30缓冲液提取大肠杆菌，得到大肠杆菌抽提物，所述大肠杆菌菌种为Rosetta(DE3)；/n配制能量供应体系，所述能量供应体系包括丙酮酸/丙酮酸激酶、磷酸肌酸/肌酸激酶以及葡萄糖；/n配制氨基酸混合物及盐溶液；采用超临界法制备卵磷脂/胆固醇脂质体；/n将所述表达质粒加入到包括大肠杆菌抽提物、能量供应体系、氨基酸混合物、盐溶液以及卵磷脂/胆固醇脂质体的无细胞蛋白表达系统中进行表达，所述表达时为连续性物质交换反应，通过半透膜向无细胞蛋白表达体系的反应液中连续加入补充液；/n所述能量供应体系包括三磷酸腺苷、鸟苷三磷酸、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、辅酶A、丙酮酸激酶、环磷酸腺苷、磷酸肌酸、肌酸激酶、丙酮酸钠以及葡萄糖；所述盐溶液包括醋酸镁、谷氨酸钾和醋酸钠；/n所述氨基酸包括：丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨基酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯基丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸以及缬氨酸；/n所述目标基因为G蛋白偶联受体的质粒DNA或其直接的PCR产物。/n