[发明专利]微球富集增强技术检测循环肿瘤细胞抗原的方法及试剂盒

摘要

本发明公开了微球富集增强技术检测循环肿瘤细胞抗原的方法及试剂盒。所述方法步骤如下：1）取乳胶微球加入MES缓冲溶液HER2兔单抗抗体，BSA，HRP，EDC混合吹打均匀；在45℃振荡反应1h；离心并用洗涤液洗涤，去上清；用封闭液定容，45℃振荡封闭30min，离心洗涤一次；最后定容储存备用；2）取细胞悬液于微孔反应条板中，用PBS定容，加入生物素标记EpCAM抗体和抗体标记的乳胶微球，室温振荡反应1h；加入链霉亲和素磁珠，室温下振荡反应1h；磁分离，洗涤并且去除上清；然后进行显色反应。一种试剂盒，包括HRP和HER2抗体标记的80nm乳胶微球。另一种试剂盒，包括80nm乳胶微球、用于标记乳胶微球的HER2兔单抗抗体和HRP。本发明灵敏度高，准确性好，具有成本优势，便于普及应用。

主权项

一种微球富集增强技术检测循环肿瘤细胞抗原的方法，其特征在于，步骤如下：1）HRP和HER2抗体标记乳胶微球的合成：取100ul固含量10% w/v 80nm乳胶微球加入MES缓冲溶液吹打均匀，再加入0.614ug HER2兔单抗抗体，90ug BSA，9ug HRP，5mg EDC并吹打均匀，总体系为1mL；在45℃振荡反应1h；离心并用洗涤液洗涤，去上清；用封闭液定容至原体积1mL， 45℃振荡封闭30min，离心并用封闭液洗涤一次；最后用含有0.5%蔗糖的封闭液定容至1mL；4℃储存备用；2）外周血中循环肿瘤细胞抗原的检测：取10‑20uL细胞悬液于微孔反应条板中，用pH为2的PBS定容至200uL，加1uL 0.04mg/mL的生物素标记EpCAM抗体和50uL步骤1）中抗体标记的乳胶微球，室温振荡反应1h；加入2 uL 1%链霉亲和素磁珠，室温下振荡反应1h；磁分离，洗涤并且去除上清；加入100微升TMB及底物混合液和50微升1%过氧化尿素溶液，室温条件下避光15min，避光结束后加入50微升硫酸终止液；磁分离，取150微升上清并在酶标仪中测量OD450。