[发明专利]一种规模化生产高纯度乌司他丁的方法

摘要

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种规模化生产高纯度乌司他丁的方法。该方法将壳聚糖与海藻酸盐与初步过滤后的尿液混合，然后采用超滤与乙醇分级沉淀联用的方式进行纯化。本申请提供的规模化生产高纯度乌司他丁的方法，操作方便，可控性强，纯化工艺简单，适于大规模生产，而且，乌司他丁的收率高达72％，纯化得到的蛋白分子量为67000±200D，抑制胰蛋白酶的活性高于4780IU/mg蛋白。

主权项

一种规模化生产高纯度乌司他丁的方法，其具体步骤如下：1）取澄清尿液，调节pH至6‑6.5，以硅胶:尿液= 8‑12kg/t的比例加入硅胶，搅拌，过滤，得滤液，调节滤液pH至4.5‑6，以壳聚糖:尿液=8‑12kg/t的比例加入壳聚糖，以重量比为海藻酸盐:壳聚糖=1‑5%的比例加入海藻酸盐，搅拌，静置，弃去上清液，得下层沉淀物1；2）向沉淀物1中加水冲洗，弃去上清液，加入硫酸铵缓冲溶液，调节pH至5‑7，得混合液1，将混合液1超滤得截留液1，其中，截留液1的体积为混合液1体积的1/10‑1/5；3）向截留液1中加入溶液A并调节pH至7‑8，搅拌，得混合液2，将混合液2进行二级超滤，得截留液2，其中，溶液A为三乙胺和异丙醇的混合溶液，超滤的压力为0.1‑0.7MPa，温度为4‑30oC，截留分子量为3×104；4）向截留液2中加入其体积1.1‑1.9倍体积浓度为95%的乙醇进行分级沉淀，过板框；向上清液中加其体积1.9‑4倍相同浓度的乙醇，过板框，得沉淀物2；5）将沉淀物2干燥，即得纯乌司他丁；其中，步骤2）中超滤的条件为：压力为0.1‑0.7MPa，温度为4‑30oC，截留分子量为5×104‑7×104；步骤3）中三乙胺和异丙醇的体积比为1:(0.1‑0.5)；步骤1）中所述的海藻酸盐为海藻酸钠。