[发明专利]一种用于检测亲水性氨基酸的富集方法

摘要

一种用于检测亲水性氨基酸的富集方法，其属于分析化学检测的技术领域。含亲水性氨基酸样品按一定比例有机溶剂提取或溶解后，然后采用硅胶表面极性基团键合相填料制备；通过优化制备过程中溶剂用量及淋洗配比等参数，实现了对样品中亲水性氨基酸的富集制备。制备后的氨基酸样品能够在一定的色谱质谱条件下，实现一次性同时检测。该方法具有稳定性好、回收率高、操作简便可控等特点。

主权项

一种用于检测亲水性氨基酸的富集方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）样品提取将样品置于离心管底部，加入提取液涡旋提取；涡旋混合30秒后，再超声3min，15000g离心5min后取全部上清液备用；所述提取液为有机溶剂与100mM缓冲盐溶液按体积比70‑90:10‑30混合的混合溶液；（2）装填固相萃取柱装填规格为30‑100mg/1mL或者100‑500mg/5mL的固相萃取柱；填料为硅胶表面极性基团键合相填料，所述极性基团为羟基、羧基、氨基、酰氨基、氰基中的一种或多种；键合相填料的粒径为5‑100 um，孔径60‑300 nm，比表面积50‑800 m2/g；（3）富集亲水性氨基酸样品先采用体积比有机溶剂∶100mM缓冲盐溶液：水=10:25:65的第一混合液对固相萃取柱进行活化；再加入体积比有机溶剂∶100mM缓冲盐溶液：水=90: 5: 5的第二混合液进行平衡；将全部上清液样品上样后，加入第二混合液进行淋洗；最后用体积比有机溶剂∶100mM缓冲盐溶液：水：酸=70:5:24:1的第三混合液进行洗脱，并收集全部的洗脱馏分，并将馏分浓缩至干后重溶于100uL 0.1moL/L的盐酸中；所述提取液、第一混合液、第二混合液、第三混合液中有机溶剂及缓冲盐溶液是相对应的，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮中的一种或多种，所述缓冲盐溶液为甲酸铵和/或乙酸铵的甲酸和/或乙酸溶液，缓冲盐溶液的pH为1‑4。