[发明专利]一种正常人NCM460细胞恶性转化模型的建立方法及鉴定方法在审
申请号: | 201610311999.0 | 申请日: | 2016-05-12 |
公开(公告)号: | CN105907702A | 公开(公告)日: | 2016-08-31 |
发明(设计)人: | 何显力;袁利娟;包国强;魏刚;乔庆;刘梓渝 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军第四军医大学 |
主分类号: | C12N5/071 | 分类号: | C12N5/071;C12N5/09;C12Q1/02 |
代理公司: | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人: | 谈杰 |
地址: | 710032 *** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | 本发明公开了一种正常人NCM460细胞恶性转化模型的建立方法,包括如下步骤:(1)细胞培养:将正常人结直肠上皮细胞接种于含有10%胎牛血清的DMEM高糖培养液中,于37℃,5%CO2培养箱中培养备用;(2)细胞恶性转化过程:其鉴定方法包括如下步骤:(1)细胞形态学观察;(2)MTT比色实验;(3)血清抗性试验;(4)锚着独立生长试验;(5)细胞划痕试验;为更好地了解结肠癌发生过程提供了较好的细胞研究模型,对于阐明结肠癌发病机制,减缓结肠癌进展,以及结肠癌的治疗具有重要意义。 | ||
搜索关键词: | 一种 正常人 ncm460 细胞 恶性 转化 模型 建立 方法 鉴定 | ||
【主权项】:
一种正常人NCM460细胞恶性转化模型的建立方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)细胞培养:将正常人结直肠上皮细胞接种于含有10%胎牛血清的DMEM高糖培养液中,于37℃,5%CO2培养箱中培养备用;(2)细胞恶性转化过程:在步骤(1)基础上,待细胞贴壁融合率达78%‑82%时,弃培养液,用PBS洗液3次,加入含有50ul/ml MNNG的DMEM培养液,于37℃,5%CO2条件下培养2h,弃培养液,用PBS洗液3次,加入含有100ng/ml PMA的DMEM培养液,于37℃,5%CO2条件下培养48h,弃培养液,加入含有10%胎牛血清的DMEM培养液,于37℃,5%CO2条件下继续培养24h,按上述步骤进行细胞传代培养,传代过程中观察细胞形态学的改变。
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