[发明专利]一种在人的生物液体样本中检测游离的稀有肿瘤细胞的方法和试剂盒

摘要

本发明提供了一种在人的生物液体样本中检测游离的稀有肿瘤细胞的方法和试剂盒。具体地，本发明提供了一种通过检测来自于肿瘤患者的生物液体样本中有核细胞的葡萄糖摄取能力及白细胞标志物CD45的表达从而鉴定其中具有活性的肿瘤细胞的方法。本发明操作简单快速，且无需对于样本中肿瘤细胞进行预先富集，一方面极少损失肿瘤细胞，另一方面基于代谢功能的鉴定方法对于液体样本中游离肿瘤细胞的鉴定较常用的免疫荧光染色的方法更为准确。

主权项

一种非诊断性地检测人生物液体样本中游离的稀有肿瘤细胞的方法，其特征在于，包括步骤：(a)提供一外周血或胸水生物样本，所述的生物样本为通过选择性裂解除去红细胞的样本；(b)将步骤(a)中的样本与针对白细胞表面抗原CD45的荧光修饰抗体共孵育，从而使样本中的白细胞表面标记针对白细胞表面抗原CD45的荧光修饰抗体；(c)将步骤(b)中获得的标记有白细胞表面抗原CD45的荧光修饰抗体的细胞样本分散于所述的微孔阵列芯片中，所述的芯片包括多个用于容纳细胞，且可以被寻址的微孔，且所述的微孔数与样本中的细胞数的比例为1:0.2‑5，优选为1:1‑3；(d)用带有荧光标记的葡萄糖类似物与所述的分布于微孔阵列中的细胞进行共培养；(e)检测各个微孔中细胞的荧光标记的葡萄糖类似物摄取量以及CD45表达的荧光信号；和(f)将高摄取葡萄糖且不表达CD45的细胞鉴定为具有活性的肿瘤细胞，并记录该细胞所在微孔的坐标位置；且所述的步骤(a)中，所述的外周血或胸水生物样本为未经过有核细胞富集的样本。