[发明专利]一种提高硝基苯降解菌降解能力的固定化方法

摘要

本发明公开了一种提高硝基苯降解菌降解能力的固定化方法，其步骤：1）硝基苯降解菌接入LB培养基中扩大培养，离心获得菌株；2）用海藻酸钠‑聚乙烯醇‑火山岩包埋获得固定化的硝基苯降解菌小球；3）活化固定化小球：将硝基苯降解菌小球从冰箱中取出，无机盐培养基洗涤，并浸泡在无机盐培养基中，曝气以活化固定化小球；4）固定化降解菌的降解性能研究：将固定化小球置于不同理化条件及不同底物浓度的硝基苯溶液中，进行硝基苯降解研究。该发明具有工艺简单、生产成本低、易于在工业上应用、提高菌株降解能力、稳定性较好及使用寿命长等优点。

主权项

1.一种提高硝基苯降解菌降解能力的固定化方法，其步骤是：1）硝基苯降解菌的扩大培养：将菌株接入液体LB培养基，30℃ 200rpm离心条件下进行扩大培养；所述的液体LB培养基组成和配比如下：在950 ml去离子水中，加入蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，氯化钠10 g，至溶质完全溶解，用5 mol·L‑1NaOH 调节pH为7.0，用去离子水定容至1L，在121℃，105kPa高温灭菌20 min；2）硝基苯降解菌菌悬液的制备：取步骤1）中好氧条件下培养至对数末期的菌液，在8000 rpm条件下离心5 min，收集菌体细胞，用无机盐培养基重悬两次后，收集菌体，4℃条件下贮藏备用；所用无机盐培养基组成如下：将 7 g Na2HPO4·12H2O、1 g KH2PO4、 10 mg CaCl2·2H2O、2 mg柠檬酸铁、20 mg MgSO4·7H2O溶于900 ml去离子水中 ，调节pH为 7.0，然后定容至1 L；3）用海藻酸钠‑聚乙烯醇‑火山岩包埋获得固定化硝基苯降解菌：取8‑10 g 聚乙烯醇、2‑3 g海藻酸钠和2.5 ‑3.0g火山岩于100 ml去离子水中，加热搅拌使其完全混匀后于121℃，105kPa灭菌20 min，冷却至室温，然后与降解菌悬液充分混合得到固定化载体与菌株的混合液；将混合液用注射器注入到含4% w/v氯化钙和1% w/v硼酸固定液中，边滴边搅拌，使其形成直径为2 mm的小球；将形成的小球放置于室温条件下交联固定16 h后，取出小球用无菌水清洗，然后在‑20℃冰箱中放置24 h，取出放置于4℃解冻，反复进行冻融2次；待小球完全解冻后，用无机盐培养基洗涤3次后置于‑20℃冰箱中备用；4）活化上述固定化小球：将上述制得的硝基苯降解细菌小球从冰箱中取出，用无机盐培养基洗涤3次，然后浸泡在无机盐培养基中，自然曝气约12 h以活化固定化小球；5）硝基苯降解研究：将固定化小球投加到含硝基苯的无机盐培养基中，进行硝基苯降解研究。