[发明专利]一种用于皮肤难愈合创面修复的脱细胞羊膜制备方法及应用

摘要

一种用于皮肤难愈合创面修复的脱细胞羊膜制备方法及应用，它涉及一种羊膜制备方法及应用。具体方法为：羊膜组织分离、清洗、消毒后，贴敷于硝酸纤维膜上晾干后制成羊膜贴片，经0.25％‑0.5％胰酶和0.2～0.5g/L EDTA·4Na混合消化液，37℃震荡消化10～30min。TE缓冲液漂洗后，TE‑TritonX‑100震荡过夜充分去除羊膜细胞。TE溶液洗涤3次后，在核酸降解液中37℃震荡降解2～4h，TE溶液清洗3次。制备后的脱细胞羊膜贴片经冷冻干燥、包装和钴60辐照灭菌后获得可长期保存，随取随用的组织工程材料。脱细胞羊膜贴片复水后可与硝酸纤维膜轻易分离用于皮肤创面的修复。

主权项

1.一种用于皮肤难愈合创面修复的脱细胞羊膜制备方法，其特征在于它是按照以下步骤进行的：一、选择足月胎盘，钝性剥离羊膜组织，生理盐水清洗2~3遍，随后置于含抗生素生理盐水中浸泡10min进行消毒处理；二、将羊膜上皮面朝上平铺于无菌硝酸纤维膜上，在无菌条件下晾置1~2小时，制成羊膜贴片；三、将羊膜贴片置于质量体积百分浓度为0.25%~0.5%胰蛋白酶和0.2~0.5g/L EDTA•4Na混合消化液中，37℃摇床震荡消化10~20min，摇床转速为70~90rpm/min；四、采用TE缓冲液清洗步骤三消化后的羊膜贴片2~3次；五、将步骤四清洗后的羊膜贴片浸泡于TE‑TritonX‑100溶液中，在温度为25℃、转速为70~90rpm/min的条件下，震荡洗涤10~16h；六、再将步骤五的羊膜贴片在TE缓冲液中清洗5~8次；七、将步骤六清洗后的羊膜贴片置于核酸降解溶液中，在温度为37℃的条件下温浴2~4小时；八、将步骤七温浴处理后的羊膜贴片置于生理盐水中清洗3~5次；九、将步骤八清洗后的羊膜贴片经过冷冻干燥、封装和辐射照灭菌后保存；所述的TE缓冲液：浓度为10mM 的TRIS‑HCl，pH=7.6；浓度为1mM的 EDT；所述的TE‑TritonX‑100溶液成分为：TE缓冲液，pH =7.6；体积百分浓度为0.5%~1%TritonX‑100。