[发明专利]一种白及种苗的组织培养方法

摘要

本专利公开了药用植物组织培养技术领域的一种白及种苗的组织培养方法，包括萌发培养基、继代培养基和生根培养基的制备；纸膜或无纺布的准备将纸膜或无纺布剪圆片或方块；将萌发培养基转移至一号培养皿中，在萌发培养基表面平铺纸膜或无纺布；将继代培养基转移至二号培养皿中；将生根培养基转移至三号培养皿中；将白及蒴果剪开获得白及种子，均匀播种在一号培养皿中，密封培养；使用无菌镊子夹持一号培养皿中纸膜或无纺布，将组培苗连同纸膜或无纺布直接在二号培养皿和三号培养皿间继代培养；炼苗、移栽。本发明相对现有技术效率高、劳动量小；获得的组培苗生长势态良好。

主权项

一种白及种苗的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、培养基的配置：萌发培养基：1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L；继代培养基：MS+NAA0.2mg/L+6‑BA1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L；生根培养基：MS+NAA0.2mg/L+6‑BA1mg/L+1‰碳粉+8%香蕉+蔗糖30g/L+琼脂6g/L；调节所述萌发培养基、继代培养基和生根培养基的pH值为5.70～6.00，分别将三种培养基转移至湿热高压灭菌锅内，进行加热加压灭菌，加热温度为121℃，压力为0.1～1.0MPa，灭菌20min后备用；步骤二、准备纸膜或无纺布：将纸膜或无纺布剪切成＜9×9cm的圆片或方块，121℃灭菌后备用；步骤三、白及蒴果的准备：在无菌环境中将成熟、完整、无霉变的白及蒴果用浓度75%的酒精浸泡25～35s后，用无菌水清洗2～4次，再用浓度0.1％的升汞浸泡15～25min，无菌水清洗3~7次；步骤四、准备培养皿：准备三个无菌的空培养皿，分别标注一号培养皿、二号培养皿和三号培养皿；将步骤一的萌发培养基转移至一号培养皿中，在萌发培养基表面平铺步骤二制备的纸膜或无纺布；将继代培养基转移至二号培养皿中；生根培养基转移至三号培养皿中；步骤五、接种：培养皿准备完成1～5min后，使用无菌处理后的剪刀，将步骤三的白及蒴果剪开获得白及种子，将白及种子均匀播种在步骤四的一号培养皿中，利用封口胶封住一号培养皿，在24±1℃的光照条件下培养25～35d；步骤六、萌发培养：步骤五的培养期满后，白及种子萌发得到组培苗，使用无菌处理的镊子夹持一号培养皿中的纸膜或无纺布，将组培苗连同纸膜或无纺布直接转移至二号培养皿中，在24±1℃的光照条件下培养；步骤七、继代培养：待二号培养皿中白及种子萌发至组培苗长度＞2cm后，使用无菌处理的镊子夹持二号培养皿中纸膜或无纺布，将组培苗连同纸膜或无纺布直接转移至三号培养皿中，在24±1℃的光照条件下培养；步骤八、待组培苗生长至长度5～6cm后，进行炼苗后获得种苗，将种苗移栽即可。