[发明专利]金银花单宁的一种原位检测方法

摘要

本发明提出了金银花单宁的一种原位检测方法，包括以下步骤：(1)、金银花样品用2％戊二醛溶液浸泡12小时；(2)、洗净样品中多余的戊二醛，用1％的四氧化锇水溶液浸泡4小时；(3)、样品用梯度酒精脱水，每级15分钟；(4)、脱水后样品用树脂包埋；(5)、切片，厚度1‑2微米；(6)、显微观察单宁。

主权项

金银花单宁的一种原位检测方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，将新鲜或充分水合后的花蕾样品用双面刀片切成小块或小片(小于1.0毫米×1.0毫米)，在1毫升2％戊二醛溶液(用pH6.8的磷酸缓冲液配制)中浸泡2小时，容器为1.5毫升带盖离心管，温度为室温，期间用真空泵抽气；第二步，吸出管中的戊二醛溶液，用pH6.8的磷酸缓冲液浸洗3次，每次20分钟，之后加入0.3毫升1％的四氧化锇水溶液，使样品在其中浸泡2小时，温度为室温；第三步，将四氧化锇溶液吸出，用梯度为10％的酒精系列脱水，从30％酒精开始，直到100％酒精，每级1毫升，15分钟；到100％酒精之后，换以100％丙酮，2次，每次20分钟；在更换溶液的过程中勿使样品接触空气，即样品始终位于液面之下；第四步，将丙酮吸出，加入含有一半丙酮和一半液态树脂的混合物1毫升，1小时后将混合物吸出，注意吸出混合物时不要让样品接触空气；之后加入纯树脂0.5毫升，2小时后将样品转入另一个含有1毫升树脂的管子里，2小时后，将样品转移到橡皮模具里，摆在模槽的两头，静置1小时，之后将模具置于培养箱内，平放，将温度调到60℃，使树脂发生聚合反应，38小时后即形成包埋块，取出；第五步，将包埋块修头部含有样品的部分修成下底0.5毫米、上底0.3毫米的梯形，用玻璃刀切片，厚度1‑2微米，取一干净载玻片，滴一滴蒸馏水，将切片转移到水滴上面，再将载玻片放在电热板上加热，直到水蒸发干净；第六步，切片降至室温后，于显微镜下观察并照相，结果，单宁显示为棕色至黑色，位于液泡内，含单宁的细胞主要是表皮毛细胞和药隔细胞。