[发明专利]一种黄绿木霉HLMM-04菌株及制备烟用香料的方法

摘要

本发明公开了一种黄绿木霉HLMM‑04菌株及制备烟用香料的方法。所述菌株为黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)HLMM‑04 CGMCC No.10839，具有产纤维素酶，进而促进纤维素分解成寡糖或单糖的能力。将菌株通过活化、发酵、过滤、透析制得纤维素酶粗酶液，用于发酵枇杷、枇杷叶、百合、山楂、胖大海混合物，再经提取、过滤、减压浓缩制成烟用香料。HLMM‑04菌株的最适产酶条件为培养基初始pH6.5，培养温度28℃，培养时间5d。加香结果表明，所制备的香料具有降低刺激，改善喉部舒适性和余味的作用。

主权项

1.一种制备烟用香料的方法，包括以下步骤：(1)将黄绿木霉HLMM‑04 CGMCC No.10839菌株活化两次后，接种于装有200mL PDA液体培养基的三角瓶中，在20～35℃，180rpm下发酵培养1～7d；所述的PDA液体培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，补蒸馏水至1L，pH5.5～8.5，115℃高压灭菌15min；所述的黄绿木霉HLMM‑04 CGMCC No.10839菌株，具有产纤维素酶，进而促进纤维素分解成寡糖或单糖的能力；(2)发酵液过滤去除菌体，取上清液缓慢加入硫酸氨至80％饱和度，4℃下静置过夜，离心收集沉淀物并溶于2mL缓冲液中，再用缓冲液进行透析，得到粗酶液；所述的缓冲液为：0.02mol/L Na₂HPO₄‑NaH₂PO₄，pH 7.3；(3)将枇杷、枇杷叶、百合、山楂、胖大海按质量比2:1:1:1:2混合，去污洗净，破碎后加入两倍重量的水，混合均匀，调pH至6.0；加入黄绿木霉HLMM‑04粗酶液，发酵，粗酶液添加量为植物原料质量的5％～20％，发酵温度为30℃，发酵时间2～5h；回流提取3h，过滤除渣，将上清液减压浓缩，即得所需烟用香料。