[发明专利]一种植物乳杆菌胞外多糖及其用于拮抗蜡样芽孢杆菌肠毒素毒性的用途

摘要

本发明提供了一种植物乳杆菌胞外多糖及其用于拮抗蜡样芽孢杆菌肠毒素毒性的用途。该多糖以制备方法表征，由于匹配了温和的纯化条件，因此其分子结构得到有效保留，所得产物结构成分单一、结构明确，同时具有较高的纯度和收率。此外，本发明通过实验手段意外发现，在该植物乳杆菌胞外多糖存在条件下，蜡样芽孢杆菌肠毒素对小肠上皮细胞的毒性受到明显抑制，具体表现为小肠上皮细胞活力得到有效保持，而且这种保护作用具有一定的广谱性。基于该植物乳杆菌胞外多糖的以上新性质，本发明确定了其作为蜡样芽孢杆菌肠毒素拮抗剂、乃至蜡样芽孢杆菌肠毒素中毒治疗药物的新用途，其疗效确切，起效快速，具有广阔的应用前景。

主权项

1.植物乳杆菌胞外多糖在制备抑制蜡样芽孢杆菌非溶血性肠毒素Nhe对小肠上皮细胞毒性的药物中的应用；在该应用中，蜡样芽孢杆菌非溶血性肠毒素Nhe的浓度为3.125％或6.25％或12.5％；在该应用中，所述植物乳杆菌胞外多糖的终浓度为1mg/mL；所述植物乳杆菌胞外多糖是通过以下方法制备的：1)取保藏编号为CCTCC M 2014170的植物乳杆菌的发酵液，固液分离取上清；2)向步骤1)所述上清液中加入乙醇，醇沉，固液分离取沉淀，以8～14KDa截留分子量的透析袋透析，取透析袋内容物干燥，即为粗多糖；3)以含有40～60mM Tris‑HCl、5～15mM MgSO4·7H2O的溶液作为粗多糖溶解液，溶解步骤2)所述粗多糖，而后加入核酸酶DNAse type‑I至终浓度2～3μg/mL，水解；4)而后加入蛋白酶Pronase E至终浓度40～60μg/mL，酶解；5)而后加入三氯乙酸至终浓度10～15％w/v，20～40min后固液分离取上清，透析，取透析袋内容物即为所述植物乳杆菌胞外多糖；其中步骤3)中粗多糖的终浓度为4～6mg/L。