[发明专利]基于GC-MS的植物非靶向代谢组学样品预处理方法

摘要

本发明公开了一种基于GC‑MS的植物非靶向代谢组学样品预处理方法，其包括步骤：1)将植物样本、内标物和预冷至‑20～4℃的亲水性有机溶剂混匀并降温至‑80～‑10℃，然后研磨粉碎，并冰水浴超声提取；2)再分别加入亲脂性有机溶剂和水，混匀，并冰水浴超声提取；于0～16℃高速离心，取水相并挥干；3)加入肟化试剂，于30～45℃进行肟化反应；4)最后加入衍生化试剂和正己烷，于60～80℃进行衍生化反应。本发明的预处理方法不仅可充分提取植物样本的初级代谢物，获得丰富的代谢物质谱数据信息，而且可尽量避免提取过程中代谢物的变化，以及脂溶性物质对气相色谱柱的污染，从而获得较好的样品重现性。

主权项

1.一种基于GC‑MS的植物非靶向代谢组学样品预处理方法,其特征在于包括如下步骤：1)将植物样本、内标物和预冷至‑20～4℃的亲水性有机溶剂混匀并降温至‑80～‑10℃,然后研磨粉碎,并冰水浴超声提取；2)再分别加入亲脂性有机溶剂和水,混匀,并冰水落超声提取；于0～16℃高速离心,取水相并挥干；3)加入肟化试剂,于30～45℃进行肟化反应；4)最后加入衍生化试剂和正己烷,于60～80℃进行衍生化反应,得到基于GC‑MS的植物非靶向代谢组学样品；步骤1)中,所述亲水性有机溶剂为甲醇、丙酮或乙醇,所述亲水性有机溶剂体积:所述植物样本重量为0.5～lmL：100mg；所述内标物为氯苯丙氨酸，所述内标物重量:所述植物样本重量为10～30μg:100mg；步骤2)中,所述亲脂性有机溶剂为氯仿、乙醚和/或乙酸乙酯,所述亲水性有机溶剂：所述亲脂性有机溶剂：水的体积比为1：0.4～0.6:0.8～1.2；步骤3)中,所述肟化试剂为甲氧胺盐酸盐,所述甲氧胺盐酸盐重量:所述植物样本重量为1.5～3:100；步骤4)中,所述衍生化试剂为N，O‑二(三甲基硅烷)乙酰胺、二甲基二氧硅烷、二甲基二氧硅烷、六甲基二硅胺、N‑甲基‑N‑(三甲基硅烷)三氟乙酰胺、含1％三甲基氯硅烷的双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺或含1％三甲基氯硅烷的N‑甲基双(三乙酰胺)；所述植物样本为植物叶片、茎部或根部的新鲜组织。