[发明专利]一种检测蔬菜中有机磷农药残留的方法

摘要

本发明涉及食品安全检测技术领域，公开了一种检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，步骤包括：提取；富集净化；空白样品测试；标准曲线的制作；待测蔬菜样品的测定。本发明利用在一定条件下、有机磷农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药浓度呈正相关的原理，快速检测出蔬菜中的有机磷农药的残留量，满足市场对蔬菜中有机磷农药快速检测的需求，有利于食品健康。

主权项

一种检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，其特征在于，步骤如下：1)提取：将蔬菜烘干，粉碎，获得蔬菜粉末，将蔬菜粉末加入到离心管中，再加入聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液，在80‑100kHz下超声提取lO‑20min，并在转速为3000‑3500rpm条件下离心15‑20min，取上层萃取液；2)富集净化：向上层萃取液中加入无机盐，搅拌混合均匀，再加入已活化的吸附剂，在60‑70℃条件下水浴30‑35min，然后在转速为3000‑3500rpm离心15‑20min，取上层溶液，向上层溶液中加入甲醇，过滤后获得富集净化液；3)空白样品测试：取不含农药的蔬菜，按照步骤1)和步骤2)，获取空白富集净化液，向空白富集净化液中加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后，在35‑40℃下水浴20‑30min，在转速5000‑6000rpm下离心8‑10min，取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A₀，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出反应前吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A₀；4)标准曲线的制作：另取5份不含农药的蔬菜，按照步骤1)和步骤2)，获取空白富集净化液，分别向其中加入有机磷农药标品使其终浓度分别为0.01、0.1、1、10、100mg/mL，然后再分别加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后，在35‑40℃下水浴20‑30min，在转速5000‑6000rpm下离心8‑10min，取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A₀，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出反应前的吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A₁；然后将本步骤4)中的前述过程重复做三次，并求得变化量△A₁的平均值，并计算出上述0.01、0.1、1、10、100mg/mL的不同浓度的有机磷农药溶液对酶的抑制率，分别对有机磷农药标准品的不同浓度取log₁₀，以对有机磷农药标准品的不同浓度取log₁₀为底得到的对数值为横坐标，以其抑制率为纵坐标，并作出标准曲线，求出该标准曲线的回归方程；5)待测蔬菜样品的测定：取待测蔬菜样品，按照步骤1)和步骤2)，获取待测富集净化液，向待测富集净化液加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后，在35‑40℃下水浴20‑30min，在转速5000‑6000rpm下离心8‑10min，取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A₂，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出反应前吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A₂；然后将本步骤5)中的前述过程重复做三次，并求得变化量△A₂的平均值，并计算出其抑制率，将该抑制率代入所述标准曲线的回归方程，就可以计算出待测蔬菜中有机磷农药的残留量。