[发明专利]一种简便的GC法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法

摘要

本发明公开一种简便的GC法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法，其特征在于：在采用三氯甲烷制备样品时简便，系统适用性，专属性，定量限，线性，准确度，精密度，耐用性，符合《中国药典》药品质量标准分析方法验证指导原则和《药品GMP指南·质量控制实验室与物料系统》的要求。本发明对现行的采用气相色谱法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法进行了改进，并且对改进后的方法进行系统适用性、准确度、精密度、专属性、定量限、线性及耐用性的验证，确保该分析方法能够满足测定要求，具有不需要将三氯甲烷挥发干、操作时间短、增加了实验效率、有机相体积为1.0 mL和操作偏差小的特点。

主权项

一种简便的GC法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法，其特征在于：采用三氯甲烷制备样品时简便，系统适用性，专属性，定量限，线性，准确度，精密度，耐用性，符合《中国药典》药品质量标准分析方法验证指导原则和《药品GMP指南·质量控制实验室与物料系统》的要求，该测定方法如下:取人血白蛋白一批次1瓶，作为方法验证供试品；溶液配制：1.5mol/L高氯酸溶液：取高氯酸12.2 mL，加超纯水定容至100 mL；正庚酸溶液：精密称定0.2 g，用三氯甲烷定容至10 mL，浓度为20 mg/mL；正辛酸溶液：精密称定0.5 g，用三氯甲烷定容至10 mL，浓度为50 mg/mL；线性溶液：分别量取正辛酸溶液120 μL、300 μL、500 μL、700 μL、900 μL，各加入正庚酸溶液1.0 mL，分别用三氯甲烷定容至10 mL，辛酸线性浓度为0.6 mg/mL、1.5 mg/mL、2.5 mg/mL、3.5 mg/mL、4.5 mg/mL；定量限溶液：取辛酸线性浓度为0.6 mg/mL溶液1.0 mL，用三氯甲烷定容至10 mL；标准品溶液：取辛酸线性浓度为3.5 mg/mL溶液作为标准品溶液；内标溶液：取正庚酸溶液2.5 mL，用三氯甲烷定容至25 mL；精密度溶液：量取人血白蛋白500 μL加水500 μL，加1.5 mol/L高氯酸溶液400 μL，振荡混匀2分钟，加1.0 mL内标溶液，振荡混匀2分钟，以3000转/分钟，离心20分钟；平行制备6份，取下层有机溶液进样；准确度溶液：分别量取人血白蛋白600 μL加水400 μL（120%溶液）、400 μL加水600 μL（80%溶液），混匀，各加1.5 mol/L高氯酸溶液400 μL，振荡混匀2分钟，各加1.0 mL内标溶液，振荡混匀2分钟，以3000转/分钟，离心20分钟，分别平行制备3份，取下层有机溶液进样；供试品溶液：精密度溶液作为供试品溶液；空白溶液：取三氯甲烷作为空白溶液；试验条件（仪器参数）：色 谱 柱：DB‑FFAP（123‑3232），0.32 mm*30 m，FID：230℃，进样口：230℃，炉温：160℃，载气：氮气，流速：2.0 mL/min，进样量：0.1 μL，运行时间：10分钟；结果计算：标准品溶液中辛酸峰与庚酸峰的分离度均应大于1.5，辛酸峰与庚酸峰面积之比的RSD应不大于5 %，以线性溶液中辛酸峰与庚酸峰面积比对辛酸浓度（mg/mL）作直线回归，求得直线回归方程，直线回归相关系数应不低于0.99，计算出供试品溶液中辛酸的浓度（mg/mL），结果计算中除辛酸峰与庚酸峰以外，其他的峰可忽略不计，再按下式计算供试品中辛酸钠含量，辛酸钠含量（mmol/g蛋白质）：式中：A 为供试品溶液中辛酸的浓度，mg/mL；n 为供试品溶液的稀释倍数（1/供试品的取用量，以mL计算）；144.22 为辛酸分子量（1 mmol辛酸相当于1 mmol辛酸钠）；C 为供试品蛋白质含量，g/mL 。