[发明专利]一种固相萃取葛根中黄酮类化合物的方法

摘要

本发明公开了一种固相萃取葛根中黄酮类化合物的方法，属于黄酮类化合物领域。本发明以黄岑素或黄岑苷为黄酮类模板，以甲基丙烯酸为功能单体，以N，N’-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂制备出分子印迹固相萃取剂，利用分子印迹固相萃取剂在葛根粉酶解液中吸附，再淋洗回收葛根黄酮化合物，对其浓缩、干燥、粉碎即可，本发明得到的葛根黄酮类提取物纯度高，分离回收率高，提取过程中不需要大量溶剂，对环境友好，而且有效成分损失少、成本低、效率快、副产物少。

主权项

 一种固相萃取葛根中黄酮类化合物的方法，其特征在于具体提取步骤为：（1）精确称取1～2mmol黄岑素或黄岑苷和5～10mmol甲基丙烯酸装入100mL带有搅拌器、温度计和通气口的三口烧瓶中，再加入50～60mL无水乙醇，启动搅拌器搅拌直至反应物完全溶解，常温下密封静置使黄酮类模板和功能单体反应过夜；（2）反应结束后在搅拌状态下继续加入4～5gN，N’‑亚甲基双丙烯酰胺交联剂和20～25mg偶氮二异庚腈引发剂，经通气口向烧瓶中通入氮气置换出瓶中空气后密闭瓶口，将烧瓶移入水浴锅加热升温至45～60℃，保温反应20～24h产生淡黄色沉淀，过滤后干燥得分子印迹聚合物；（3）将上述得到分子印迹聚合物研磨后过100目标准筛，将过筛后的粉末放入其体积3～5倍由0.5mol/L甲醇和0.3mol/L醋酸按体积比为10:1组成的混合液中沉降至上层液澄清为止，过滤后干燥即得分子印迹固相萃取剂，备用；（4）称取1～2kg葛根放入药材粉碎机中粉碎并过100目标准筛，将500～600g过筛后的葛根粉装入搪瓷酶解罐中，再加入1～2L蒸馏水，用搅拌棒搅拌均匀后，按反应底物总质量6～8%加入复合酶制剂后，用浓度为0.5mol/L盐酸调节pH至4～5，放入恒温箱，在40～45℃下酶解6～8h；（5）酶解结束后，过滤去除滤渣得到酶解液，量取400～500mL酶解液装入1L烧杯中，按液固比为3:1向酶解液中加入备用的分子印迹固相萃取剂，再将烧杯放置超声振荡仪中，在频率为25～35kHz和功率为100～200W的条件下超声固相萃取50～60min；（6）萃取结束后过滤分离得到固相萃取剂，将其装入直径为3cm，高为20cm的圆柱形玻璃柱中，用1～2L无水乙醇分3～5次对玻璃柱中的固相萃取剂进行淋洗并从玻璃柱下方收集淋洗液，将淋洗液合并后装入蒸馏装置中，蒸馏回收无水乙醇后得到葛根黄酮化合物浓缩液，最后经真空冻干后粉碎并过200目标准筛，包装，即得葛根黄酮类提取物。