[发明专利]一种介导抗体依赖性的细胞毒性的细胞因子诱导杀伤细胞的制备方法及其试剂盒

摘要

本发明提供了一种介导抗体依赖性的细胞毒性的细胞因子诱导杀伤细胞的制备方法，其中包括如下特征：构建成干扰素γ信号肽和肿瘤细胞结合多肽并链接可结晶片段域重链的第2和3恒定区基因片段，重组到病毒载体上并转染人细胞因子诱导杀伤细胞，高表达新的多肽‑可结晶片段域重链的第2和3恒定区融合蛋白，可引发抗体依赖性的细胞毒性活性，同时细胞因子诱导杀伤细胞增殖倍数达到1000倍以上，表达CD3+/CD56+为40％以上，CD16+为30％以上，体内体外试验抗肿瘤具有很强杀伤毒性；本发明还提供了一种含通过上述方法而得到的自体细胞因子诱导杀伤细胞增殖培养的试剂盒，具有高效的抗肿瘤功能。

主权项

一种介导抗体依赖性的细胞毒性的细胞因子诱导杀伤细胞的制备方法，其特征在于，构建成干扰素γ信号肽(IFNγ‑SP)和肿瘤细胞结合多肽(TCBP)并链接可结晶片段域(Fc)重链的第2和3恒定区(Ch2 and Ch3)的基因片段，重组到病毒载体上并转染人细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)；其高表达新的多肽‑可结晶片段域重链的第2和3恒定区融合蛋白，可引发抗体依赖性的细胞毒性活性；激活细胞因子诱导杀伤细胞增殖倍数达到1000倍以上，其表达CD3+/CD56+为40％以上，以及CD16+为30％以上，体内体外试验抗肿瘤具有很强杀伤毒性；培养到第21天的CIK细胞通过荧光定量PCR技术检测，转染了SP‑(TCBP)n‑L‑Fc病毒载体的CIKs其表达SP‑(TCBP)n‑L‑Fc基因高于未转染的CIKs为100倍以上；蛋白印迹技术检测其SP‑(TCBP)n‑L‑Fc融合蛋白表达水平，灰度分析SP‑(TCBP)n‑L‑Fc病毒转染的CIKs培养上清中其灰度高于2000以上。