[发明专利]一种以适配体为支架原位合成纳米银的SERS方法

摘要

本发明公开了一种以适配体为支架原位合成纳米银的SERS方法，是以适配体为支架在病原菌表面原位合成纳米银壳达到目标菌SERS信号特异性增强的方法，目的旨在特异性增强目标菌株的SERS信号，简化数据分析程序，通过拉曼光谱图直观辨别出所检测菌株。基于SERS技术和适配体快速检测致病菌,可以在1h内定量检测出金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌。并且做到了在短积分时间（2s，是正常积分时间的1/10‑1/5）内也可采集到低信噪并且稳定谱图。首次将适配体免标记直接应用于SERS技术，首次在没有拉曼标记物的情况下，依靠光谱图直观辨别细菌，为实现SERS技术在细菌检测领域广泛应用提供了基础。

主权项

1.一种以适配体为支架原位合成纳米银的SERS方法，包括以下步骤：1）在LB培养基中200rpm、37℃条件下震荡培养冷冻的病原菌11小时；取1ml107cfu/ml细菌用 MilliQ H2O洗涤两次；然后将细菌贮存在4℃冰箱中待用；2）使用热循环仪95℃变性两分钟，每40秒降2℃逐渐降温至37℃，折叠好的适配体储存于4℃冰箱备用；3）适配体捕获病原菌： 300nM折叠好的适配体分别与特异性病原菌和非特异性病原菌孵育20min，用缓冲液洗涤2次以去除未结合的适配体，4℃保存备用；4）将步骤3）中适配体捕获的病原菌与10mM硝酸银孵育5min，加入10mM硼氢化钠溶液，离心，弃上清，1ml MilliQ H2O重悬，4℃保存备用；5）将步骤4）中样品进行拉曼扫描。