[发明专利]一种修复多环芳烃污染土壤酶制剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种修复多环芳烃污染土壤酶制剂的制备方法，属于酶制剂制备技术领域。本发明通过培养醋酸钙不动杆菌制得菌丝悬浮液，经化学破碎，透析浓缩得浓缩酶液，经硅藻土负载后干燥，从而得到修复多环芳烃污染土壤酶制剂的制备方法。实例证明，本发明不仅操作简便，不会引起二次污染，而且利用微生物体内提取出可以降解多环芳烃污染物的胞外酶，用载体对其进行固定，制备出可以直接应用于降解的酶制剂，提高了降解效率，且修复周期短，不易受到环境及土著菌的影响，修复彻底，适合大规模生产应用。

主权项

一种修复多环芳烃污染土壤酶制剂的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）按接种量为8～10%将醋酸钙不动杆菌接种于含200～300mg/kg多环芳烃污染土壤的液体无机盐培养基中，在30～40℃下恒温摇床振荡培养1～2周，将菌种驯化以及活化；（2）再将上述活化后的菌种用接种环转接到含100～150mg/kg多环芳烃污染土壤的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，放入恒温箱，在35～45℃下恒温培养7～9天；（3）待菌种培养结束后，用无菌水缓慢淋洗菌丝表面5～10min，收集淋洗液，得到菌丝悬浮液，放入卧式离心机中，在4～6℃下以6000～8000r/min的转速离心5～10min分离去除上清液，得到湿菌体；（4）称将50～60g上述得到的湿菌体装入500mL烧杯中，向其中加入300～400mL质量浓度为30%盐酸胍溶液，放置在超声振荡仪中，以200～300W功率超声振荡处理2～4h，再以10000～12000r/min的转速离心3～5min分离去除细胞碎片，将上清液转入透析袋，用流动蒸馏水透析浓缩至透析液不再浑浊，得浓缩酶液；（5） 将硅藻土和浓缩酶液按固液比为1:5进行混合后放入漩涡振荡仪中，在4～6℃的冰水浴下以30～40W功率旋涡振荡固定7～9h，固定结束后用纱网过滤，分离得到沉淀物，沉淀物经真空冻干机干燥后即得一种修复多环芳烃污染土壤酶制剂。