[发明专利]一种气相色谱质谱联用测定山核桃脂肪酸含量的方法

摘要

本发明公开了一种气相色谱质谱联用测定山核桃脂肪酸含量的方法。步骤如下(1)山核桃仁含油率测定；(2)山核桃油样品快速甲酯化；(3)对脂肪酸甲酯化样液进行检测；(4)制作脂肪酸标准曲线和拟合方程；(5)确定待测山核桃样品的脂肪酸含量。本发明中采用索氏提取仪对山核桃油脂进行提取，操作简单、油脂提取完全、含油率准确；采用快速甲酯化方法，大大简化了操作过程，同时避免了剧毒物质的使用；采用外标法对山核桃各个脂肪酸含量进行定性和定量分析，结果准确，可重复性高。本发明对山核桃中脂肪酸绝对含量的测定具有重要的意义，值得广泛推广。

主权项

一种气相色谱质谱联用测定山核桃脂肪酸含量的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：(1)山核桃仁含油率的测定：将山核桃样品破壳、取仁，使用粉碎机将山核桃仁粉碎后获得用于提取油脂的山核桃粉；取质量为M1的山核桃粉，采用索氏提取仪提取山核桃油脂，提取剂为乙醚，加热温度为110℃，浸提时间1.5‑2小时，滤提时间1.5‑2小时，获得质量为M2的油脂，则山核桃仁的含油率P油为：(2)山核桃油样品快速甲酯化：取山核桃油样放置于具塞试管中，加入正己烷使油样完全溶解，加入氢氧化钾‑甲醇溶液，震荡，使油样静置至澄清，再加入硫酸氢钠，摇振，使得最后溶液的PH值小于等于7，从而获得脂肪酸甲酯化样液；(3)对脂肪酸甲酯化样液进行检测：将脂肪酸甲酯化样液放入气质联用仪进行检测，得到总离子流图；检测时的参数设置如下：GC条件：色谱柱型号为DB‑WAX，样品进样量为1μL，进样口温度为250℃，载气为纯净氦气，载气流速为1ml/min，采用分流模式，分流比为50：1；升温程序：起始温度50℃，停留1分钟，然后以25℃/分钟的速率爬升至200℃，最后以3℃/分钟的升温速率爬升至230℃，停留5分钟，总运行时间为22分钟；MS条件：溶剂延迟2分钟，GC‑MS接口温度280℃，电子轰击电离源，离子源温度230℃，离子能量70eV，四极杆温度150℃，扫描模式为全扫描，质量范围30‑500质量单位；(4)制作脂肪酸标准曲线和拟合方程：配置不同浓度梯度的脂肪酸甲酯标准品溶液；将配置好的标准品溶液在步骤(3)中的检测环境和检测条件下进行气质联用检测，获得脂肪酸甲酯标准品的总离子流图；通过脂肪酸分子量和脂肪酸甲酯分子量的比值将脂肪酸甲酯含量转化为脂肪酸含量，转换公式如下所示：其中，W酸为脂肪酸含量，W甲酯为脂肪酸甲酯含量，M酸为脂肪酸的分子量，M甲酯为脂肪酸甲酯的分子量；以脂肪酸甲酯标准品的总离子流图中的峰面积作为自变量，以脂肪酸含量作为因变量，制作脂肪酸标准曲线，并拟合该标准曲线得到脂肪酸标准拟合方程；(5)确定待测山核桃样品的脂肪酸含量：将待测山核桃样品重复步骤(1)‑(3)，得到总离子流图，将待测山核桃样品的总离子流图中的峰面积导入脂肪酸标准拟合方程，获得待测山核桃油样品中脂肪酸的精确含量山核桃仁中脂肪酸的精确含量按照以下公式计算得到：其中，W精确为待测山核桃仁中脂肪酸的精确含量，为待测山核桃油样品中脂肪酸的含量，P油为山核桃样品的含油率；所述脂肪酸甲酯标准品选自油酸甲酯、亚油酸甲酯、棕榈油酸甲酯、亚麻酸甲酯、棕榈酸甲酯和硬脂酸甲酯；所述脂肪酸选自油酸、亚油酸、棕榈油酸、亚麻酸、棕榈酸和硬脂酸。