[发明专利]IL-12/CD107a融合蛋白增强CTL抗肿瘤效果的治疗剂及其制法和用途

摘要

本发明提供高效低毒的肿瘤治疗剂及其制法和用途。具体地，本发明提供了一种IL-12/CD107a融合蛋白。在本发明中，通过利用含IL-12/CD107a融合基因的慢病毒修饰抗肿瘤T细胞。CD107a在溶酶体与细胞膜融合的同时可以迁移到细胞膜的表面，把IL-12带到细胞膜上，从而实现肿瘤细胞膜表面IL-12的释放。实验表明，在本发明中，可在T细胞攻击肿瘤的局部实现定点和定时释放IL-12，从而改变T细胞-肿瘤组织的免疫微环境，进而实现抗肿瘤免疫效果的最大化，并显著降低毒副作用。

主权项

一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括融合在一起的以下元件：(i)任选的位于N端的信号肽和/或前导肽；(ii)第一蛋白元件；(iii)第二蛋白元件；以及(iv)任选的位于第一蛋白元件和第二蛋白元件之间的连接肽元件；其中，所述信号肽可操作地连于由(ii)、(iii)和(iv)所构成的融合元件；并且第一蛋白元件为IL‑12蛋白元件；第二蛋白元件为CD107a蛋白元件；在另一优选例中，所述的CD107a是去掉CD107a分泌肽的CD107a成熟的蛋白元件；在另一优选例中，所述的“可操作地连于”指所述信号肽可引导所述融合元件的表达或跨膜转移(定位)；在另一优选例中，所述的融合蛋白具有选自下组的结构：(1)式Ia所述结构：D‑A‑B  (Ia)，或(2)式Ⅱa所述结构：D‑A‑C‑B  (Ⅱa)，其中，A为IL‑12蛋白元件；B为CD107a或CD107a成熟蛋白元件；C为任选的连接肽元件；D为任选的信号肽信号肽和/或前导肽序列；“‑”表示连接上述元件的肽键或肽接头；在另一优选例中，所述的连接肽元件包括序列如SEQ ID NO.:12所示的连接肽；在另一优选例中，所述的IL‑12蛋白来源于人或非人哺乳动物；在另一优选例中，所述的IL‑12蛋白包括野生型和突变型；在另一优选例中，所述的IL‑12蛋白包括全长的、成熟形式的IL‑12，或其活性片段；在另一优选例中，所述的第一蛋白元件包括IL‑12蛋白的一个或两个亚基；在另一优选例中，所述的IL‑12蛋白的亚基选自下组：P40和P35亚基；在另一优选例中，所述的第一蛋白元件包括连接在一起的IL‑12蛋白P40和P35亚基；在另一优选例中，所述的P40和P35亚基为“头‑头”、“头‑尾”、“尾‑尾”相连；在另一优选例中，所述的P40和P35亚基之间存在或不存在接头(linker)；较佳地，所述的接头为柔性的4‑20个氨基酸的接头，更佳地，所述的接头为GGGGGGS(G₆S)(SEQ ID NO.:14)；在另一优选例中，所述的IL12蛋白元件的序列如SEQ ID NO.:6所示；在另一优选例中，所述的成熟CD107a蛋白元件中缺少了分泌肽；在另一优选例中，所述的CD107a蛋白来源于人或非人哺乳动物；在另一优选例中，所述的CD107a蛋白包括全长的、成熟形式的CD107a，或其活性片段；在另一优选例中，所述的CD107a蛋白元件的序列如SEQ ID NO.:8所示；在另一优选例中，所述的肽接头的长度为0‑15个氨基酸，较佳地1‑10个氨基酸；在另一优选例中，所述融合蛋白还包括信号肽元件D；在另一优选例中，所述的融合蛋白中，在单链IL‑12(第一蛋白元件)和CD107a(第二蛋白元件)之间设有连接肽，优选SGSG序列(SEQ ID NO.:12)；在另一优选例中，所述的融合蛋白中，第一蛋白元件为单链IL‑12，在所述单链IL‑12中，在P40亚基及P35亚基设有连接肽G₆S(SEQ ID NO.:14)；在另一优选例中，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.:2所示；在另一优选例中，所述融合蛋白具有以下多种特征：a)所述融合蛋白CD107a去掉了分泌肽；b)所述融合蛋白包含IL‑12的两条亚基,即P40和P35亚基,并由GGGGGGS(G6S)连接；在另一优选例中，所述的融合蛋白为单体、或二聚体。