[发明专利]一种基于金杂化炭黑插层还原石墨烯的甲胎蛋白电致化学发光传感器的制备方法

摘要

本发明涉及一种基于金杂化炭黑插层还原石墨烯的甲胎蛋白电致化学发光传感器的制备方法，属于电化学发光传感器领域。以三联吡啶钌为电化学发光信号源，利用金杂化炭黑插层还原石墨烯优良的生物兼容性和大的比表面积增加抗体的固载量。用纳米多孔银作为二抗标记物，根据对不同浓度的待测物的电化学发光信号强度的不同，实现对肝癌标志物甲胎蛋白的检测。

主权项

一种基于金杂化炭黑插层还原石墨烯的甲胎蛋白电致化学发光传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）纳米多孔银‑三联吡啶钌标记的甲胎蛋白抗体溶液的制备1）纳米多孔银‑三联吡啶钌标记物溶液的制备将0.1 ~ 10 mg银铝合金放入20 ~ 500 mL、浓度为0.5 ~ 1.5 mol/L的氢氧化钠溶液中，室温下化学腐蚀12 ~ 36 h，5000 ~ 8000 r/min下离心洗涤4 ~ 8次，在真空干燥箱里干燥24 ~ 48 h，制得纳米多孔银；将1 ~ 3 mg的纳米多孔银分散到1 ~ 10 mL超纯水中，加入1 ~ 5 mL、浓度为0.5 ~ 1.5 mmol/L的三联吡啶钌溶液，室温避光振荡12 ~ 36 h，4000 ~ 8000 r/min下离心洗涤3 ~ 9次，将产物重新分散到1 mL超纯水中，得到纳米多孔银‑三联吡啶钌标记物溶液；2）纳米多孔银‑三联吡啶钌标记的甲胎蛋白抗体溶液的制备将1 mL、浓度为1 ~ 3 mg/mL的纳米多孔银‑三联吡啶钌标记物溶液与100 ~ 500 μL、浓度为5 ~ 15 μg/mL甲胎蛋白检测抗体混合，振荡12 ~ 36 h，4000 ~ 6000 r/min下离心洗涤10 ~ 20 min，得到纳米多孔银‑三联吡啶钌标记的甲胎蛋白抗体孵化物，将其分散于1 mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，制得纳米多孔银‑三联吡啶钌标记的甲胎蛋白抗体溶液；（2）电致化学发光免疫传感器的制备方法1）将直径为4 mm的玻碳电极用1.0 μm、0.3 μm、0.05 μm氧化铝抛光粉依次做抛光处理，用超纯水冲洗干净；2）将2 ~ 10 μL、浓度为1 ~ 3 mg/mL的甲胎蛋白抗体捕获基底材料金杂化炭黑插层还原石墨烯溶液于电极表面，4 ℃保存；3）用3 ~ 9 μL、质量分数为0.5 ~ 1.5%的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4 ℃冰箱中孵化1 ~ 5 h，清洗干净；4）将2 ~ 6 μL浓度为0.0001 ~ 30 ng/mL的一系列不同浓度的甲胎蛋白用于捕获抗体的特异性识别，室温下孵化1 h，清洗干净；5）将4 ~ 8 μL浓度为1 ~ 3 mg/mL的纳米多孔银‑三联吡啶钌标记的甲胎蛋白抗体溶液滴在电极上与抗原特异性识别，室温下孵化1 h，清洗干净，于4 ℃冰箱中储存备用。