[发明专利]一种快速繁殖金铁锁种苗的方法

摘要

本发明提供了一种快速繁殖金铁锁种苗的方法，包括种籽处理、原球茎诱导、原球茎增殖培养、丛生芽诱导、丛生芽增殖培养、壮苗培养，其特征是金铁锁种籽消毒处理后接种到原球茎诱导培养基培养，形成直径2～3mm的原球茎后，原球茎切割后转接到原球茎增殖培养基中培养，获得大量的直径2～3mm的原球茎，原球茎转接到丛生芽诱导培养基中培养，获得大量的长度1～2mm的从生芽，丛生芽转接到增殖培养基中培养，获得大量的长度为10～20mm的丛生芽，分成单芽转接入壮苗培养基上培养，获得大量的长度为80～100mm的脱毒金铁锁种苗。使用本发明繁殖金铁锁种苗育苗周期短、繁殖系数高、种苗质量好。

主权项

一种快速繁殖金铁锁种苗的方法，其特征是步骤如下：（1）种籽处理：选择成熟、饱满、干透的金铁锁种籽，用洗衣粉溶液浸泡20～30min后，用清水冲洗3～5次，再用70%～75%酒精浸泡20～30s后，用无菌水冲洗2～3次，再用0.1%～0.2%HgCl2浸泡6～8min后，用无菌水冲洗5～7次，最后用无菌滤纸吸干水分；（2）原球茎诱导：按步骤（1）处理的金铁锁种籽接种到原球茎诱导培养基，在昼温18～23℃，夜温15～20℃的温度下暗箱培养8～10天后，萌动膨大的种籽在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～1500Lx，昼光照时长10～12h的条件下再培养6～8天，形成直径2～3mm的原球茎，原球茎诱导培养基为：1/2MS培养+6‑BA（芐基腺嘌呤）0.5～1mg/L+蔗糖25～30g/L+琼脂6.1～6.5g/L，pH为5～6；（3）原球茎增殖培养：取步骤（2）中得到的原球茎切割后转接到原球茎增殖培养基中，在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～1250Lx，昼光照时长12～14h的条件下培养10～15天，获得大量的直径2～3mm的原球茎，原球茎的增殖培养基为：MS培养基+NAA（萘乙酸）0.15～0.19mg/L+2.4‑D（2.4‑二氯苯氧基乙酸）0.3～0.5mg/L+6‑BA（芐基腺嘌呤）0.2～0.5mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂5.1～5.5g/L，pH为5～6；（4）丛生芽诱导：将步骤（3）中得到的生长状态良好的原球茎转接到丛生芽诱导培养基上，在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～1250Lx，昼光照时长12～14h的条件下培养30～40天，获得大量的长度1～2mm的丛生芽，丛生芽诱导培养基为：MS培养基+NAA（萘乙酸）0.15～0.19mg/L+2.4‑D（2.4‑二氯苯氧基乙酸）0.3～0.5mg/L+6‑BA（芐基腺嘌呤）0.2～0.5mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂5.1～5.5g/L+香蕉泥30～50g/L+土豆泥30～50g/L，pH为5～6；（5）丛生芽增殖培养：将步骤（4）得到的丛生芽转接到增殖培养基中，在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～1250Lx，昼光照时长12～14h的条件下培养15～25天，获得大量的长度为10～20mm的丛生芽，丛生芽增殖培养基为：MS培养基+NAA（萘乙酸）0.15～0.19mg/L+2.4‑D（2.4‑二氯苯氧基乙酸）0.3～0.5mg/L+6‑BA（芐基腺嘌呤）0.2～0.5mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂5.1～5.5g/L+香蕉泥30～50g/L+土豆泥30～50g/L，pH为5～6；（6）壮苗培养：将步骤（5）所得到的丛生芽，分成单芽转接入壮苗培养基上培养，在昼温24～26℃、夜温19～21℃的温度，光照1200～2000Lx，昼光照时长12～14h的条件下培养25～35天，获得大量的长度为80～100mm的脱毒金铁锁种苗，壮苗培养基为：1/2MS培养基+NAA（萘乙酸）0.15～0.19mg/L+2.4‑D（2.4‑二氯苯氧基乙酸）0.3～0.5mg/L+6‑BA（芐基腺嘌呤）0.2～0.5mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂5.1～5.5g/L+香蕉泥30～50g/L+土豆泥30～50g/L，pH为5～6。