[发明专利]增强间充质干细胞趋化能力和趋化因子CCL5表达方法

摘要

增强间充质干细胞趋化能力和趋化因子CCL5表达方法，涉及间充质干细胞。脐带间充质干细胞的分离及原代培养脐带间充质干细胞的传代；脐带间充质干细胞的鉴定；TNF‑α和IFN‑γ对hUC‑MSCs的刺激；Real‑Time PCR检测CCL5的表达；ELISA检测CCL5的表达。使MSCs表达CCL5提高了924倍，能够获取大量天然的CCL5，相对于真核表达，不需要脂质体转染，便捷快速。TNF‑α和IFN‑γ的刺激，提升了间充质干细胞的迁移能力，提示间充质干细胞能够在体内更迅速的募集到组织损伤及炎症部位，发挥组织修复和免疫调节功能。

主权项

1.增强间充质干细胞趋化能力和趋化因子CCL5表达方法，其特征在于包括以下步骤：1)脐带间充质干细胞的分离及原代培养，具体方法为：取婴儿脐带组织，浸泡于MSC培养基MSCM，在超净台内用PBS清洗残留的血液，去除脐静脉、脐动脉及脐带外膜，剥离Wharton胶，剪碎成1～2mm3大小的组织块；将组织块移至0.1％Ⅱ型胶原酶中，加入MSCM，在37℃恒温振荡仪内消化，至Wharton胶全部消化；将含有细胞的消化液吸入无菌离心管，以30倍体积的MSCM吹打细胞，用2000r/min离心10min，弃上清液；用添加有10％胎牛血清的α‑MEM培养基重悬细胞，接种到培养瓶中，置于5％二氧化碳细胞培养箱中进行培养，细胞贴壁后，第5天首次换液，弃去未贴壁的细胞，以后每3～4天换液一次；2)脐带间充质干细胞的传代，具体方法为：待细胞培养至80％融合，用含有0.25％EDTA的胰蛋白酶溶液消化细胞，重悬细胞，然后接种到新的培养皿中，传代细胞，待细胞长至90％融合后，进行下一次传代培养；3)脐带间充质干细胞的鉴定，具体方法为：采用流式细胞术检测CD29、CD34、CD44、CD45、CD90；同时进行成脂肪细胞和成骨细胞的诱导鉴定；4)TNF‑α和IFN‑γ对hUC‑MSCs的刺激，具体方法为：用含有TNF‑α和IFN‑γ的α‑MEM的培养基培养hUC‑MSCs 12h，所述的TNF‑α和IFN‑γ的浓度分别为20ng/ml、50ng/ml；细胞生长的培养基只含有青霉素和氯霉素体积百分比为1％，胎牛血清的体积百分数为1％；5)Real‑Time PCR检测CCL5的表达；6)ELISA检测CCL5的表达。