[发明专利]一种活细胞内CdS量子点的合成方法

摘要

本发明公开了一种活细胞内CdS量子点的合成方法，采用以宫颈癌HeLa细胞为载体，以细胞生长代谢活动为动力，以HeLa细胞内源性物质谷胱甘肽为稳定剂和保护剂，通过将镉离子和硫离子先后与HeLa细胞共孵育后，使镉离子和硫离子在细胞代谢活动的驱动下反应成核生成CdS量子点，再通过细胞裂解、破碎、离心等一系列方法处理，制得荧光稳定、性质优良的CdS量子点，其荧光发射波长为450 nm左右，为立方晶型结构，水溶液中量子点的尺寸大小约为3.0 nm；与现有技术相比，该量子点毒性小，生物相容性较传统方法合成出的CdS量子点大大提高，可直接用于生物体系。

主权项

 一种活细胞内CdS量子点的合成方法，其特征在于：以宫颈癌细胞HeLa细胞为载体，利用细胞生命代谢活动为动力制备CdS量子点， 具体制备步骤如下：步骤1）细胞培养：将HeLa细胞置于装有完全培养基的培养瓶中，并放入培养箱（37℃，5%CO₂）中孵育至细胞密度为80%~90%；步骤2）细胞与镉离子共孵育： 取出步骤1）装有HeLa细胞的培养瓶，吸弃培养基，用磷酸盐缓冲液（PBS）清洗HeLa细胞两次后，加入新配制的含镉离子溶液，其镉离子浓度为0.5~2.5 μmol/百万个细胞，置于培养箱（37℃，5%CO₂）中孵育2~6 h，制得含有镉离子的HeLa细胞；所述的含镉离子溶液是向完全培养基中加入含镉化合物配制含镉离子溶液，并先后经0.45 μm和0.22 μm滤膜过滤制得；步骤3）细胞与硫离子共孵育：取出步骤2）制得的含有镉离子的HeLa细胞培养瓶，吸弃培养基，用磷酸盐缓冲液（PBS）清洗HeLa细胞两次后，加入新配制的含硫离子溶液，其硫离子浓度为0.5~2.0 μmol/百万个细胞，置于培养箱（37℃，5%CO₂）中孵育4~32 h，制得含CdS的HeLa细胞；所述的含硫离子溶液是向完全培养基中加入含硫化合物配制含硫离子溶液，并先后经0.45 μm和0.22 μm滤膜过滤制得；步骤4）CdS量子点提取：用细胞刮刀将含CdS量子点的HeLa细胞取出，转移至离心管，10000 rpm离心10 min，用PBS洗涤两次后收集细胞；向所收集的细胞中加入200~500 μL RIPA裂解液（强），用细胞破碎机将细胞裂解20~40 min，14000rpm离心5min，取上清液；步骤5）CdS量子点纯化及表征：向步骤4）所得上清液内，加入异丙醇（上清液与异丙醇体积比为1:1‑3）使CdS量子点沉淀，3000 rpm离心5 min，取沉淀；重复上述步骤三次后，将沉淀经冷冻干燥即得到量子点粉末；量子点经去离子水稀释，测其光谱及结构性质；所述的完全培养基由90%DMEM高糖培养基和10%血清组成；所述的DMEM高糖培养基的组成为： D‑葡萄糖4.5g/L， L‑谷氨酰胺0.584g/L， 碳酸氢钠3.7g/L，丙酮酸钠0.110g/L，青霉素80 U/ml，链霉素0.08 mg/ml。