[发明专利]一种通过磁控电化学适配体传感器同时检测两种霉菌毒素的方法

摘要

本发明提供了一种通过磁控电化学适配体传感器同时检测两种霉菌毒素的方法，包括如下步骤：金纳米粒子包覆的Fe₃O₄微球的水分散液的制备；水溶性碲化镉量子点溶液和水溶性硫化铅量子点溶液的制备；单分散硅烷化SiO₂纳米粒子水分散液的制备；碲化镉量子点包覆的SiO₂纳米球分散液和硫化铅量子点包覆的SiO₂纳米球分散液的制备；MB-aptamer1和MB-aptamer2捕获探针的制备；适配体1的互补链与SiO₂@PbS偶联得到cDNA1-SiO₂@PbS以及适配体2的互补链与SiO₂@CdTe偶联得到cDNA2-SiO₂@CdTe纳米生物探针的制备；MB-aptamer1/DNA1-SiO₂@PbS和MB-aptamer2/DNA2-SiO₂@CdTe纳米生物复合材料的制备；传感器的构建及样品的检测。本发明使用的丝网印刷电极结构简单，加工方法简便、成本低，具有检测方法操作方便、检测灵敏度高等特点。

主权项

一种通过磁控电化学适配体传感器同时检测两种霉菌毒素的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、金纳米粒子包覆的Fe₃O₄微球的水分散液的制备；步骤2、水溶性碲化镉量子点溶液和水溶性硫化铅量子点溶液的制备；步骤3、单分散硅烷化SiO₂纳米粒子水分散液的制备；步骤4、CdTe QDs包覆的SiO₂纳米球分散液和PbS QDs包覆的SiO₂纳米球分散液的制备：取步骤2制备的CdTe QDs溶液、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺溶液、步骤3制备的SiO₂纳米粒子水分散液混合均匀，在冰水浴中搅拌反应，反应结束后，将产物离心分离、洗涤，再将产物分散到蒸馏水中，备用；取步骤2制备的PbS QDs溶液、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺溶液、步骤3制备的SiO₂纳米粒子水分散液混合均匀，在冰水浴中搅拌反应，反应结束后，将产物离心分离、洗涤，再将产物分散到蒸馏水中，备用；步骤5、MB‑aptamer1和MB‑aptamer2捕获探针的制备：包括用MB为载体负载经巯基修饰的伏马毒素B1的适配体1，简称为MB‑aptamer1；用MB为载体负载经巯基修饰的赭曲霉毒素A的适配体2，简称为MB‑aptamer2；具体如下：将aptamer1的Tris‑HCl缓冲溶液与含有磷酸三氯乙酯的Tris‑HCl缓冲溶液混合，振荡反应，反应完毕后，离心后得到即时活化的aptamer1溶液A，将所述活化的aptamer1溶液A与步骤1得到的金纳米粒子包覆的Fe₃O₄微球的水分散液混合，得到混合液B，向混合液B中加入6‑巯基己醇溶液得到混合液C，将混合液C进行振荡反应，反应完毕后，对产物进行磁性分离并洗涤，最后将产物重新分散到水中，备用；将aptamer2的Tris‑HCl缓冲溶液与含有磷酸三氯乙酯的Tris‑HCl缓冲溶液混合，振荡反应，反应完毕后，离心后得到即时活化的aptamer2溶液D，将所述即时活化的aptamer2溶液D与步骤1得到的金纳米粒子包覆的Fe₃O₄微球的水分散液混合，得到混合液E，向混合液E中加入6‑巯基己醇溶液得到混合液F，将混合液F进行振荡反应，反应完毕后，对产物进行磁性分离并洗涤，最后将产物重新分散到水中，备用；步骤6、适配体1的互补链与SiO₂@PbS偶联得到cDNA1‑SiO₂@PbS以及适配体2的互补链与SiO₂@CdTe偶联得到cDNA2‑SiO₂@CdTe纳米生物探针的制备：取步骤4制备的CdTeQDs包覆的SiO₂纳米球的水分散液与含有1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺的Tris‑HCl缓冲溶液混合，得到混合液G，将混合液G在室温下搅拌反应a，加入溶有适配体1的互补链的Tris‑HCl缓冲溶液，得到混合液H，室温下进行搅拌反应b，反应完毕后离心得到产物，并将产物重新用Tris‑HCl缓冲溶液分散，备用；取步骤4制备的PbS QDs包覆的SiO₂纳米球的水分散液与含有1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺的Tris‑HCl缓冲溶液混合，得到混合液I，将混合液I在室温下搅拌反应c，加入溶有适配体2的互补链的Tris‑HCl缓冲溶液，得到混合液J，对混合液J进行室温下搅拌反应d，反应完毕后离心得到产物，并将产物重新用Tris‑HCl缓冲溶液分散，备用；步骤7、MB‑aptamer1/DNA1‑SiO₂@PbS和MB‑aptamer2/DNA2‑SiO₂@CdTe纳米生物复合材料的制备：取步骤6制得的cDNA1‑SiO₂@PbS分散液与步骤5制得的MB‑aptamer1分散液混合，得到混合液K，室温下振荡反应，反应完毕后磁性分离产物并洗涤，最后将产物重新分散于Tris‑HCl缓冲液中，备用；取步骤6制得的cDNA2‑SiO₂@CdTe分散液与步骤5制得的MB‑aptamer2分散液混合，得到混合液L，室温下振荡反应，反应完毕后磁性分离产物并洗涤，最后将产物重新分散于Tris‑HCl缓冲液中，备用；步骤8、传感器的构建及样品的检测，包括：铋膜修饰的丝网印刷电极的制备：将与电化学工作站连接的丝网印刷电极浸入硝酸铋溶液中，通过外加电压e沉积Bi³⁺，沉积完毕后，洗涤并干燥，铋膜修饰的丝网印刷电极；对OTA和FB1标准品进行检测，建立标准曲线：将FB1和OTA标准品溶液分别与含有MB‑aptamer1/DNA1‑SiO₂@PbS和MB‑aptamer2/DNA2‑SiO₂@CdTe的混合液反应，室温下温育，反应完毕后用磁铁收集反应后的磁性复合材料，用PBS冲洗后用含有PBS和HNO₃的混合溶液稀释得到底液；将工作站相联的铋膜修饰的丝网印刷电极浸入含底液和HAc‑NaAc缓冲溶液的混合溶液中，在外加电压f下沉积Cd和Pb金属单质，然后利用方波伏安法检测Cd²⁺和Pb²⁺的溶出峰，通过Cd²⁺和Pb²⁺的溶出峰高与对应OTA和FB1标准品浓度建立标准曲线。