[发明专利]用于酶固定化的改性壳聚糖微球、其制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种用于酶固定化的改性壳聚糖微球、其制备方法及应用，上述制备方法包括：在0.5g壳聚糖粉末中加入质量分数为5%的乙酸溶液，充分溶解后，加入液体石蜡，搅拌10分钟，升温至50℃，滴加乳化剂Span80，乳化10分钟；加入0.5～2.0mL的甲醛溶液，搅拌反应1.5小时；升温至70℃，滴加质量分数为10%的NaOH溶液，在缓慢滴加1.0～2.5mL的环氧氯丙烷，反应5小时；过滤，用蒸馏水、石油醚、无水乙醇洗涤、水洗涤，得到壳聚糖微球（NCTS）；在50mgNCTS中加入50mL N,N‑二甲基甲酰胺(DMF)，浸泡过夜后；加入250mg乙二胺，在氮气保护下于90℃下搅拌反应12小时，用1mol/L的盐酸加热处理9小时，进行碱洗、酸洗、水洗，再干燥至恒重，得到改性壳聚糖微球（NCTS‑EDA）。本发明提供固定化酶的良好载体。

主权项

1.一种用于酶固定化的改性壳聚糖微球的制备方法，其特征在于，包括：（1）在0.5g壳聚糖粉末中加入30mL质量分数为5%的乙酸溶液，待壳聚糖粉末充分溶解后，加入30mL液体石蜡，搅拌10分钟；（2）将步骤（1）的所得物升温至50℃，滴加2‑3滴乳化剂Span80，乳化10分钟；（3）在步骤（2）的所得物中加入1.0mL的甲醛溶液，搅拌反应1.5小时；（4）将步骤（3）的所得物升温至70℃，滴加5‑6滴质量分数为10%的NaOH溶液，在溶液pH值保持为碱性条件下，缓慢滴加2.0mL的环氧氯丙烷，反应5小时；（5）将步骤（4）的所得物过滤，用蒸馏水洗涤，再依次用石油醚、无水乙醇洗涤、水洗涤，直至洗涤液的pH值达到中性；（6）在50mg步骤（5）的所得物中加入50mL反应溶剂N,N‑二甲基甲酰胺，浸泡过夜后；（7）在步骤（6）的所得物中加入250mg乙二胺及催化剂金属钠，在氮气保护下于90℃下搅拌反应12小时，得到改性壳聚糖微球；（8）将步骤（7）的所得物用1mol/L的盐酸加热处理9小时，接着依次进行碱洗、酸洗和水洗，直至洗涤液的pH值达到中性，再干燥至恒重，得到用于酶固定化的改性壳聚糖微球；其中，各步骤中搅拌反应的搅拌速率为250r/min。