[发明专利]家蚕蚕茧抗真菌蛋白酶抑制剂在抗真菌中的应用及其制备方法

摘要

本发明公开了家蚕蚕茧抗真菌蛋白酶抑制剂在抗真菌中的应用及其分离方法，分离方法如下：将蚕茧分层、剪碎，然后加入pH7.5、100mM的Tris‑HCl缓冲液，在37℃、转速220rpm条件下提取30min；然后在室温，转速为10000rpm下离心15min，上清液用0.22μm滤膜过滤后，得家蚕蚕茧抗真菌蛋白酶抑制剂；获得的蛋白酶抑制剂能够抑制林伯氏白色念球菌分泌的真菌蛋白酶K的活性，抑制家蚕致病性真菌球孢白僵菌的孢子萌发，并且在沸水中孵育10min后仍保持活性；属于天然的、高活性、高稳定性的抗真菌蛋白质，无毒无害；同时，本发明利用的蚕丝资源丰富，为蚕丝的多元化开发利用提供了新途径。

主权项

1.家蚕蚕茧抗真菌蛋白酶抑制剂在制备抗真菌的药物中的应用，其特征在于：所述家蚕蚕茧抗真菌蛋白酶抑制剂的分离方法包括如下步骤：将蚕茧分为6层并取最外层蚕茧、剪碎，然后加入pH7.5、100mM 的Tris‑HCl 缓冲液，在37℃、转速220rpm 条件下提取30min；然后在18℃～25℃，转速为10000rpm下离心15min，取上清液，用0.22μm 滤膜过滤后，收集滤液得家蚕蚕茧蛋白酶抑制剂；所提取的主要成分是29种蛋白酶抑制剂，占总蛋白含量的89%，所述29种蛋白酶抑制剂氨基酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.28 和SEQ ID NO.29所示。