[发明专利]一种规模化获取桃胚培养无菌苗的技术

摘要

一种规模化获取桃胚培养无菌苗的技术，属于植物生物技术领域，包括培养基制备、桃果实的清洗、表面浸泡杀菌、种子分离、梯度H2O2溶液浸泡、无菌水冲洗、种仁分离与接种、低温处理、室温出苗等步骤，其中以种子的梯度H2O2溶液浸泡为创新技术特征。本技术利用种子种皮及胚乳中的过氧化物酶与H2O2反应释放活性氧以杀灭种子可能携带的微生物，同时梯度H2O2溶液的浸泡便于将种皮与种仁分离。该技术操作简单，安全性好，便于进行桃胚培养的规模化种子消毒、种皮种仁分离，降低污染率，提高接种效率，为规模化获取桃胚培养无菌苗提供了新方法。

主权项

一种规模化获取桃胚培养无菌苗的方法，它包括以下操作步骤：培养基的制备、果实的清洗、浸泡杀菌、种子的取出、种子消毒、无菌水冲洗、种仁剥离与接种、低温处理、出苗管理，其特征在于：它的具体工艺如下：1）培养基的制备制备桃胚培养用WPM培养基，并分装在相应的塑料或玻璃试管至试管的五分之一到四分之一高度，盖上试管塞，高压灭菌后室温冷却备用；2）果实清洗成熟的桃果实除去果梗后，用加适量洗涤液的自来水清洗干净；3）酒精浸泡桃果实在干净的室内用75%酒精浸泡10～15min；4）种子的取出用剪核刀剖开果实，剪开种核，取出种子；5）种子消毒①梯度H2O2溶液浸泡之低浓度H2O2溶液浸泡：种子浸入盛有0.2%～0.5% H2O2溶液的组培瓶中，直至取完实验种子，为便于后续操作，含200ml低浓度H2O2溶液的组培瓶以放入100～150粒种子为宜；②梯度H2O2溶液浸泡之高浓度H2O2溶液浸泡：操作转移到超净台上，将低浓度的H2O2溶液倒出至空烧杯，加入3%～5% H2O2溶液，盖上组培瓶盖子，缓慢摇动瓶子5～8min，使种子浮动与溶液充分接触；6）无菌水冲洗倒出瓶中的H2O2溶液，加入无菌水冲洗种子3～4次，最后一次的无菌水不用倒出；7）种仁剥离与接种超净台上用镊子稍微夹破胚乳端种皮，用带有无菌手套的母指和食指轻微挤压种子，取出种仁，接种到含有实验用培养基的试管中；8）低温处理接种试管置于2～4℃冷库中低温处理3个月左右；9）出苗管理将接种桃胚的试管取出，置于22～28℃有散射光的环境中使幼胚萌发成苗。