[发明专利]一种促进白菜小孢子胚胎发生及直接成苗的方法

摘要

本发明提供了一种促进白菜游离小孢子培养胚胎发生及直接成苗的方法，以解决现有游离小孢子培养技术中小孢子胚胎发生率低、直接成苗率低、培养周期长的问题。通过向诱导培养基NLN中添加组蛋白去乙酰化酶抑制剂-辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)，以提高白菜小孢子胚胎发生率和直接成苗率。在添加0.025μM~0.10μM SAHA的NLN诱导培养基中，白菜的小孢子胚胎发生率提高了1.42~4.35倍，直接成苗率提高了1.11 ~1.50倍。

主权项

一种促进白菜小孢子胚胎发生及直接成苗的方法，其特征是包括如下步骤：  （1）游离小孢子培养采用常规白菜游离小孢子培养方法分离纯化小孢子，用含SAHA的浓度为0.025μM ~ 0.10 μM NLN培养基培养小孢子，小孢子密度为1×10⁵～2×10⁵个/mL NLN培养基；将每5 mL小孢子悬浮液分装入为60 mm×15 mm的无菌玻璃培养皿内, 每皿添加100μL灭菌后的琼脂糖0.5g/L、活性炭10g/L的混合液，用石蜡膜封口后，先在33℃恒温箱中热激处理1天，再转至25℃下静置暗培养，至肉眼可见胚状体后，再转移到转数为50rpm的摇床上继续暗培养，18天后小孢子发育为子叶型胚状体；（2）胚状体成苗在接种小孢子后第18天转接子叶型胚状体到添加30 g·L^‑1蔗糖，7.5 g·L^‑1琼脂，0.1 g·L^‑1活性炭的MS培养基上，其pH为 5.8～6.0，高温湿热灭菌；接种量为每100mL广口三角瓶含50mL培养基接种5个胚状体；于25±1℃，16h小时光照/天条件下培养；15～20天后胚状体发育为根、茎、叶明显健壮的小苗。