[发明专利]一种荧光探针法常温等温核酸扩增法在审
| 申请号： | 201510419444.3 | 申请日： | 2015-07-17 |
| 公开（公告）号： | CN105018466A | 公开（公告）日： | 2015-11-04 |
| 发明（设计）人： | 李贤祯;周国辉;程奇 | 申请（专利权）人： | 浙江泰晶生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 大庆市建华专利事务所 23119 | 代理人： | 孙薇 |
| 地址： | 311115 浙江省杭州市余*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种荧光探针法常温等温核酸扩增法，包括恒温条件下，单链结合蛋白将双链的母链局部打开成单链；重组酶与引物结合成复合体，在辅助蛋白的作用下结合到母链上，荧光探针也与互补区域结合；DNA聚合酶结合到引物的3’末端，进行子链的延生；核酸外切酶识别双链状态下的荧光探针上的四氢呋喃位点，酶切后使荧光基团和淬灭基团得以分离，释放荧光；荧光探针被切断后，露出了原本被探针3'末端修饰所封闭掉的3'-OH端，DNA聚合酶可以继续延伸形成子链；通过检测扩增曲线的形状，和荧光信号的强弱，可对待测样本进行定性且半定量检测。本发明的核酸扩增法可在常温且恒温检测，并能够对核酸待测物进行定性且半定量测定。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 荧光 探针 常温 等温 核酸 扩增 | ||
【主权项】：
一种荧光探针法常温等温核酸扩增法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)恒温条件下，单链结合蛋白将双链的母链局部打开成单链；(2)重组酶与引物结合成复合体，在辅助蛋白的作用下结合到母链上，荧光探针也与互补区域结合，所述的荧光探针中部标记有四氢呋喃，四氢呋喃两侧分别为荧光基团和淬灭基团，荧光基团和淬灭基团之间间距为2‑6nt，荧光探针3’末端标记阻抑聚合酶延伸或扩增的修饰基团；(3)DNA聚合酶结合到引物的3’末端，进行子链的延生；(4)核酸外切酶识别双链状态下的荧光探针上的四氢呋喃位点，酶切后使荧光基团和淬灭基团得以分离，释放荧光；(5)荧光探针被切断后，露出了原本被探针3'末端修饰所封闭掉的3'‑OH端，DNA聚合酶可以继续延伸形成子链；(6)通过检测扩增曲线的形状，和荧光信号的强弱，可对待测样本进行定性且半定量检测。
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