[发明专利]一种检测原代神经干细胞迁移极化的方法及其应用

摘要

本发明涉及一种检测原代神经干/祖细胞迁移极化的方法。用PDMS制备带有显微通道的印章，将印章扣在包被多聚赖氨酸的培养皿上，从通道的一边加入含有作用因子和荧光分子的溶液，溶液进入孔道形成间隔相等的平行条带。在包被好荧光条带的培养皿上进行神经干细胞培养，观察条带间隙中神经干细胞贴壁后伪足的方向，计算干细胞前后端面积二者的比率。本发明不仅有助于神经干细胞迁移起始‑极化可视化，且对极化定量分析及机制的探讨有潜在的开发价值。在本发明的基础上，检测不同分子对神经干细胞迁移极化的影响，探索迁移极化的分子机制，通过外源性给予细胞分泌因子，启动体内神经干细胞的迁移等功能，为神经干细胞治疗神经退行性疾病奠定基础。

主权项

一种检测原代神经干细胞迁移极化的方法，其特征在于，包括如下步骤：a.在模具上用二甲基硅氧烷制备下表面有平行显微通道的PDMS印章；b.条带包被取消毒的玻片放入培养皿中，加入多聚赖氨酸进行包被，将制备好的PDMS印章扣在多聚赖氨酸包被的玻片上，将需要研究的导向因子用FITC‑BSA稀释到作用浓度，然后加入到印章的微通道一端，于通道另一端抽吸使溶液充满整个通道，待溶液干后，移除印章，在玻片上形成含有导向因子的平行条带；c.在包被好荧光条带的玻片上进行神经干细胞培养；d.使用免疫荧光技术进行染色，观察条带间隙中神经干细胞贴壁后伪足的方向，计算神经干细胞前端与后端的伪足面积比值，判断神经干细胞是否极化所述PDMS印章下表面的通道宽为60μm、高为100μm，每个平行的通道之间间隔为90μm；所述步骤b中多聚赖氨酸浓度为0.1mg/ml；所述判断神经干细胞是否极化的方法为：当神经干细胞前端与后端的伪足面积比值为0.8‑1.2时为未极化；当神经干细胞前端与后端的伪足面积比值＞1.2时发生极化。