[发明专利]一种三七活血化瘀活性的检测方法

摘要

一种三七活血化瘀活性的检测方法，所述方法以三七抑制血小板聚集的效价PT来评估三七活血化瘀的活性。本申请的效价生物检测法可以准确、快速、定量地分析不同产地、不同生长时间、不同生产批次等的三七的抗血小板聚集活性。在药材生产、加工、销售等环节，效价检测可以作为药材及其提取物质量控制的手段之一。

主权项

一种三七活血化瘀活性的检测方法，所述检测方法包括下述步骤：a.配制供试品溶液(1)制备三七提取物；(2)用生理盐水或者磷酸盐缓冲液配置所述三七提取物的溶液，超声助溶30min后，离心取上清，以微孔滤膜过滤除菌，备用；b.配制标准物质溶液用生理盐水或者磷酸盐缓冲液配置所述标准物质溶液，所述标准物质为三七皂苷标准物质按比例混合物、三七总皂苷标准物质；c.测定(1)将标准物质溶液和血小板悬液两者加入到安瓿瓶中并混匀，然后将混匀的悬液加至血小板聚集仪的供试品池中，用血小板聚集仪来记录经标准物质抑制血小板聚集的曲线；(2)将供试品溶液和血小板悬液两者加入到安瓿瓶中并混匀，然后将混匀的悬液加至血小板聚集仪的供试品池中，用血小板聚集仪来记录经三七供试品抑制血小板聚集曲线；d.生物活血化瘀效价计算 PT＝AT×R其中PT为效价，AT为估计效价， r是S和T相邻高低剂量组的比值，dS、dT为标准物质S和三七供试品T的等反应剂量；T1、T2、T3、S1、S2和S3中的1,2,3是顺次由小剂量到大剂量；所述方法以三七抑制体外血小板聚集的效价PT来评估三七活血化瘀活性，所述PT按照2010年版《中国药典》生物检测统计法项下的量反应平行线法(3·3)法计算三七供试品的效价及实验误差，可信限率FL％不得超过40％，其中抑制血小板聚集的含三七皂苷类供试品溶液的浓度在0.1～6mg/mL之间，其中，所述方法中包括获得未经药物干预的血小板聚集曲线的步骤： 将血小板悬液放入血小板聚集仪的供试品池中，用血小板聚集仪来记录未经药物干预的诱导剂诱导的血小板聚集曲线，记录时间为300s，即得到所述未经药物干预的血小板聚集曲线，用于检验实验系统的可行性，获得未经药物干预的血小板聚集曲线、经标准物质干预的血小板聚集曲线或经三七供试品干预的血小板聚集曲线时加入血小板聚集诱导剂，所述诱导剂为凝血酶，凝血酶的用量范围为1‑3.3U/mL；用于获得未经药物干预的血小板聚集曲线、经标准物质干预的血小板聚集曲线或经三七供试品干预的血小板聚集曲线的血小板数量范围为30‑80万/μL。