[发明专利]新型微柱凝胶法血小板抗体检测试剂盒及其制备方法

摘要

本发明涉及一种新型微柱凝胶法血小板抗体检测试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括微柱凝胶卡、指示红细胞和血小板抗原，其制备方法包括微柱凝胶卡的制备和抗IgG致敏醛化红细胞的制备。本发明新型微柱凝胶法血小板抗体检测试剂盒灵敏度高，特异性好，质量稳定，检测过程耗时短，方法简便易行，结果易于判定，可同时对大量样本进行检测，易于自动化，能够使血小板配型技术成为临床常规检测项目。

主权项

一种新型微柱凝胶法血小板抗体检测试剂盒及其制备方法，其特征在于：所述试剂盒包括微柱凝胶卡、指示红细胞和血小板抗原，所述微柱凝胶卡上有多个微柱管，每个微柱管中均包括若干个聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶颗粒；所述试剂盒的制备包括以下步骤：一、微柱凝胶卡的制备步骤一、凝胶悬浮介质的配制所述凝胶悬浮介质配方如下：对羟基苯甲酸甲酯（5. 0‑6.5）×l0^‑4g／ml、对羟基苯甲酸丙酯（1. 2‑1.5）×l0^‑4g／ml、甘氨酸（1. 6‑1.9）×l0^‑2g／ml、氯化钠（1. 6‑1.8）×l0^‑3g／ml、磷酸二氢钾（2. 0‑2.4）×l0^‑4g／ml、磷酸氢二钠（4.5‑4.8）×l0^‑4g／ml，以上试剂混合后用蒸馏水溶解，调pH值为6.6‑6.8；步骤二、凝胶的制备选用大小为30‑60纳米的聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶颗粒与步骤一配制的凝胶悬浮介质按照体积比2：1～6：1的比例混合后配制成凝胶；步骤三、分装将步骤二配制的凝胶按照每管20‑30微升的量，分别加入到微柱凝胶卡的多个微柱管中；二、指示红细胞的配制步骤一、红细胞醛化1）O型红细胞洗涤：在离心机3000rpm下离心1min，然后弃上清，用0.9%的生理盐水洗涤6‑8次后配制成5%红细胞；2）红细胞醛化处理：在a所得的5%红细胞和2.5%戊二醛按照体积比5:1‑2:1进行混合；3）醛化后红细胞的洗涤：在离心机2500rpm下离心经过b醛化后的红细胞2.5分钟，并用0.9%的生理盐水溶液洗涤5‑6次；4）醛化红细胞的保存：用0.9%生理盐水溶液把红细胞浓度调成20%，然后在4℃下进行储存，有效期二年；步骤二、抗IgG致敏醛化红细胞的制备1）按常规方法配制pH为6.6‑7.5的磷酸盐缓冲液（PBS）；2）用生理盐水洗涤上述步骤一所得醛化后的红细胞4次，PBS洗涤1次，在3000rpm下离心3分钟后弃上清液，将得到的红细胞悬浮于2mL PBS中；3）加入2mL37°C的PBS/5mgTCA；4）37°C水浴振荡15分钟；5）生理盐水洗涤1次，PBS洗涤1次后悬浮于2mL PBS 中；6）加入2mL IgG溶液；7）37°C下水浴振荡60分钟；8）快速用生理盐水洗涤5次，PBS洗涤1次。