[发明专利]一种重组人肝细胞生长因子裸质粒的高密度发酵方法

摘要

本发明涉及生物制药技术领域，具体地提供一种重组人肝细胞生长因子裸质粒的高密度发酵方法。根据本发明的重组人肝细胞生长因子裸质粒的高密度发酵方法，包括以下步骤：1)工作种子培养；2）接种于发酵罐发酵。本发酵方法可实现在50L规模发酵中重组人肝细胞生长因子裸质粒的高表达，最终菌体浓度OD600可达55以上，且裸质粒含量可达420mg/L以上，从而解决了重组人肝细胞生长因子裸质粒含量低和产率达不到规模化要求的技术难题，为重组人肝细胞生长因子裸质粒的产业化奠定了坚实基础。

主权项

一种重组人肝细胞生长因子裸质粒的高密度发酵方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)工作种子培养：将工作种子库的菌种接种于一级种子培养基中，置于摇床进行培养，控制温度35‑38℃，转速200‑230 rpm，培养7‑9h，得到一级种子液；将一级种子液以2‑8%的接种量接种于二级种子培养基中，置于摇床进行培养，控制温度35‑38℃，转速200‑230 rpm，培养15‑17 h，即得到发酵工作种子液；2)接种于发酵罐发酵：将制备好的发酵工作种子液以2‑5%的接种量接种于含发酵培养基的发酵罐中进行发酵，机械搅拌转速为150‑500rpm，通气量为10‑80L/min，罐压为0.2‑0.4par，维持溶氧水平在20‑60%，发酵温度为36‑38℃，加入25‑28%（v/v）氨水控制发酵pH在6.9‑7.2；用紫外分光光度计测定菌体浓度OD600为1‑2时，开始以4mL/L·h的流速补加碳源补料培养基，发酵过程中每隔1h进行离线检测葡萄糖浓度，根据葡萄糖浓度反馈补料，控制葡萄糖浓度在0.2‑0.8g/L；紫外分光光度计测定菌体浓度OD600为4‑6时，以5‑7mL/L·h的流速开始补加有机氮源补料培养基；培养至菌体生长速度减缓，停止发酵收集菌体。