[发明专利]木通种苗的培养方法

摘要

本发明属于植物细胞工程技术领域，木通种苗的培养步骤依次包括预处理、无菌外植体获得、幼芽组织培育、愈伤诱导增殖、胚状体诱导增殖和生根培养及移栽；采用本发明生产木通种苗的技术方案，其产生的有益效果是（1）增殖率高，生物产量大，培养周期短；（2）组培苗质量好，种苗健壮，栽培成活率高；本发明利用通过预处理、无菌外植体获得、幼芽组织培育、愈伤诱导增殖、胚状体增殖和生根培养及移栽的方法对木通种苗进行培育相对于其它培养方式具有扩繁效率高、培养时间短、转接方便；种苗健壮、栽培成活率高及成本低，适合木通种苗规模化培育生产。

主权项

一种木通种苗的培养方法，培养步骤依次包括预处理、无菌外植体获得、幼芽组织培育、愈伤诱导增殖、胚状体诱导增殖、生根培养及移栽；其特征在于，具体包括以下步骤：（1）预处理：不同的外植体的类型采用不同的浸泡预处理及冷藏预处理；（2）无菌外植体获得：不同的外植体的类型采用不同消毒灭菌方式获得无菌外植体用于下一步培养；（3）幼芽组织培育：将步骤（2）中获得的无菌外植体接种至液体浅层幼芽组织培育培养基中进行幼芽的诱导；（4）愈伤诱导增殖：将步骤（3）中获得的幼芽接种至液体浅层愈伤诱导培养基上进行愈伤组织的诱导培养得到状态良好的愈伤组织；（5）胚状体诱导增殖：将步骤（4）中获得的良好的愈伤组织接种到固液双层胚状体培养基上进行胚状体增殖培养；（6）生根培养及移栽：将步骤（5）中获得的胚状体浸泡处理后接种到固体生根培养基上进行生根培养，然后将得到的生根苗炼苗后栽培到基质中进行生长得到木通种苗；所述的步骤（1）中的所述外植体为枝条或种子；所述的步骤（1）中，当所选外植体为枝条时，所述预处理的方法是：将所述外植体离体后立即置于添加1~5g/L PVP+1~3g/L Vc的水溶液中进行浸泡处理3~5h，后置于2~8℃条件下保湿冷藏5~10 d；当所选外植体为种子时，所述预处理的方法是：将所述外植体清洗干净后浸泡到0.1~0.5%浓度的高锰酸钾水溶液中浸泡0.5~2h后，喷洒少量0.5~0.2%浓度的多菌灵后于2~8℃保湿冷藏处理30~60d；所述的步骤（3）中的所述幼芽组织培育的培养基配方为WPM或MS+0.5~4.0mg/L GA3+0.1~1.5g/L PVP+30 g/L蔗糖，pH5.6~6.0；培养条件为：光照4~6h/d，温度25±1℃；所述液体浅层厚度为0.5~3cm；所述的步骤（4）中愈伤诱导增殖的培养基的配方为WPM或MS+1.0~4.0mg/L 2,4‑D+0.05~0.5mg/L NAA+0.1~1.5g/L PVP+30 g/L蔗糖，pH5.6~6.0；培养条件为：光照0 h/d，温度25±1℃；所述液体浅层厚度为0.5~3cm；所述的步骤（5）中所述固液双层胚状体培养基中的液体培养基的配方为WPM或MS+0.2~2.0 mg/L TDZ+0.02~0.5mg/L NAA+1.0mg/L KT+0.1~1.5g/L PVP +30 g/L蔗糖，pH5.6~6.0，厚度为0.2~1cm；所述固液双层胚状体培养基的下层为添加6.5g/L琼脂的固体培养基，从而形成固液双层培养基；培养条件为：光照强度1500‑2000 lux，光照10~15 h/d，温度25±1℃；所述的步骤（6）中生根培养及移栽中，首先将胚状体放入到添加1~5g/L PVP+1~3g/L Vc的水溶液中浸泡1~2h，后接种到固体生根培养基中进行生根培养，所述生根培养基的配方为1/2MS+1.0~2.0 mg/L IBA+0.01~0.1 mg/L NAA+40 g/L蔗糖，pH5.6~6.0；培养条件为：光照强度1500‑2000 lux，光照10~15 h/d，温度25±1℃。