[发明专利]一种磁珠法结合离心套管提取DNA的方法

摘要

本发明公开了一种磁珠法结合离心套管提取DNA的方法，包括以下步骤：1)将检材置入离心套管的内套管内，将TES缓冲液、十二烷基肌氨酸钠、蛋白酶K按体积比混匀后加入离心套管的内套管内，置金属浴上裂解；2)加入吸附液再次离心；3)去除内套管，加入吸附液，加入磁珠悬浊液置自动涡旋仪上吸附；4)置于磁力架上吸去上清后置离心机内离心再次吸去残液；5)加入冰乙醇涡旋后，置于磁力架上，充分吸去上清，置离心机内离心再次吸去残夜；6)烘干磁珠，加入洗脱液充分涡旋后置金属浴上孵化；7)PCR扩增液内扩增；本发明方法检出率高，最终模板保有量达50‑70％，特别适用于微量检材的检验，可检出模板含量在100pg以上的现场DNA检材。

主权项

1.一种磁珠法结合离心套管提取DNA的方法，所述方法适用于检验模板含量在100pg以上的现场DNA 检材,其特征在于包括以下步骤：（1）将检材置入离心套管的内套管内，将TES缓冲液、十二烷基肌氨酸钠、蛋白酶K10mg/ml按体积比10:2～3:2～3混匀后，取160～200微升，加入离心套管的内套管内，置37～56℃金属浴上裂解20～30分钟，95～99℃裂解10～15分钟；（2）将离心套管放入离心机中13000～17000g离心0.5～1分钟，打开离心套管的管盖加入吸附液200～300微升，再次放入离心机13000～17000g离心2～5分钟；（3）打开离心套管管盖，去除内套管，加入吸附液700～1000微升，加入磁珠悬浊液10～16微升，置自动涡旋仪上1000～1300转吸附15～20分钟；（4）将离心套管的离心管置于磁力架上，充分吸去上清后，置离心机内6000～8000g离心20～30秒，再次吸去残液；（5）加入‑20℃冰乙醇600～800微升，充分涡旋后，置于磁力架上，充分吸去上清，置离心机内6000～8000g 离心20～30秒，再次吸去残夜；（6） 置56℃金属浴上烘干磁珠，加入洗脱液20～100微升，充分涡旋后，置56～60℃金属浴上孵化15～20分钟；（7）将磁珠悬浊液加入PCR 扩增液内扩增。