[发明专利]一种人源乙醛脱氢酶1的构建方法

摘要

本发明提供一种人源乙醛脱氢酶1的构建方法，该方法包括：步骤1，载体构建，以HaCaT角质细胞的总cDNA为模板扩增得到人ALDH1的基因全长，将得到的基因片段克隆到pET 30a质粒中，构建好的质粒转入细菌后即可用于蛋白质的表达；其中，引物序列如下：Sense:5’–TTTT GAATTC ATG TCA TCC TCA GGC ACG CC，下划线为EcoR I酶切位点；Antisense:5’–TTTT CTCGAG TTA TGA GTT CTT CTG AGA G，下划线为Xho I酶切位点；步骤2，菌体的诱导；步骤3，重组蛋白的收集和纯化。

主权项

一种人源乙醛脱氢酶1的构建方法，该方法包括：步骤1，载体构建：从人的HaCaT角质细胞系分离总RNA，合成cDNA；以pOTB7质粒为模板，设计ALDH1cDNA的两端引物，进行PCR扩增；选择乙醛脱氢酶1/pOTB7阳性载体用EcoR I和Xho I进行双酶切，酶切片段克隆至卡那霉素抗性的pET 30a质粒中，转入细菌中进行蛋白质表达；其中，引物序列如下：Sense:5’–TTTT GAATTC ATG TCA TCC TCA GGC ACG CC，下划线为EcoR I酶切位点；Antisense:5’–TTTT CTCGAG TTA TGA GTT CTT CTG AGA G，下划线为Xho I酶切位点；步骤2，菌体的诱导：活化的菌种平板上取单菌落，接种于含有卡那霉素的LB液体培养基中培养，用异丙基硫代半乳糖苷进行诱导；步骤3，收集步骤2得到的菌体，经破碎处理得蛋白质粗提液，纯化后得重组人源乙醛脱氢酶1。