[发明专利]一种酒瓶兰组织培养快速繁殖方法

摘要

一种酒瓶兰组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：(1)以消毒过的酒瓶兰种子作外植体，置于MS发芽培养基中进行诱导发芽得到无菌试管苗；(2)将所述试管苗置于MS丛芽培养基中进行繁殖培养获得丛生芽；(3)将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中培养获得健壮植株；(4)将所述健壮植株置于1/2MS生根培养基中培养获得生根苗；(5)取生根苗进行炼苗，并移植于沙床生长一个月，再移栽到大田。采用本发明所述的繁殖方法得到的丛生芽增殖系数为20～30倍，获得组培苗生根率在95％以上，移栽苗床成活率在90％以上，有效解决了酒瓶兰工厂化育苗的问题。

主权项

一种酒瓶兰组织培养快速繁殖方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒：取酒瓶兰的种子作外植体，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5分钟，线状自来水冲洗15～20分钟，添加2～3滴吐温‑20的100mg/L0.1％升汞消毒8～10分钟，无菌水冲洗3～5次，最后用消毒滤纸去除表面水份，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；(2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)获得的外植体接种到MS丛芽培养基中，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养35天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中，MS丛芽培养基为MS基本培养基中加入GA3赤霉素0.1～0.5mg/L，30mg/L蔗糖，5mg/L琼脂，培养基的pH为6.0；(3)试管苗丛生芽快速扩繁培养：将步骤(2)得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，获得无菌试管苗丛生芽，其中，MS繁殖培养基为MS基本培养基中加入TDZ 0.1～1.0mg/L，KT0.1～0.5mg/L，IBA0.1～1.0mg/L，30mg/L蔗糖，5mg/L琼脂，培养基的pH为6.0；(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，得到健壮植株，其中，MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入6～BA 0.5～1.5mg/L，NAA 0.1～0.5mg/L，30mg/L蔗糖，5mg/L琼脂，培养基的pH为6.0；(5)健壮植株生根培养：将步骤(4)得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基培养，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，得到带根完整植株，其中，1/2MS生根培养基为MS基本培养基中加入0.1～1.0mg/L NAA，0.1～0.5mg/L ABT生根粉，15g/L蔗糖，5g/L琼脂，培养基pH为6.0；(6)炼苗与移栽：组培瓶中加入少量自来水，松开瓶盖，炼苗一周，待表面角质形成后，将幼苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到大田。