[发明专利]一种贴壁细胞定量代谢组学分析样品预处理的方法

摘要

本发明公开了一种贴壁细胞定量代谢组学分析样品预处理的方法。该方法主要针对每个培养皿内残留缓冲液不均一问题，采用缓冲液洗涤细胞后，再用96孔板离心机离心去除残留液体的方法，该方法能使每个培养皿内几乎无液体残留，便于后续定量或半定量分析。

主权项

一种贴壁细胞定量代谢组学分析样品预处理的方法，其特征在于，操作为：贴壁培养细胞首先弃掉培养基，然后以4℃的等渗缓冲盐洗涤细胞3次，第4次在培养皿内加入适量缓冲盐后，手工倾倒出液体，将培养皿倒扣放置在96孔板离心机转子上，2000‑3500rpm离心1分钟；此时培养皿内所有液体几乎全部清除干净；再取含有定量内标的1毫升体积比为1:1的甲醇水溶液作为水相于培养皿内，内标成分可依据分析目的而定；用细胞刮铲刮下细胞，收集细胞悬液，将细胞悬液全部收集到含有2毫升冷氯仿作为有机相的15毫升离心管内，冰浴条件下超声3次，每次15秒，功率30瓦；冰上静置15‑30分后，4度10000‑14000rpm离心10‑20分钟；离心后，取750微升上清液，置于干净的1.5毫升离心管内；下层氯仿层用1毫升注射器小心吸取1.5毫升左右到一干净离心管内，再依据需要，准确吸取一定量有机相到新的1.5毫升离心管内；残留的中间蛋白层，倒入铝箔称量盘，干燥至恒重，用于校正细胞数目；水相和有机相样品可以直接进行分析，或者经过冻干浓缩复溶后再分别进行水溶性和脂溶性样品分析。