[发明专利]蛹虫草生产方法

摘要

本发明提出了一种蛹虫草生产方法，其特点是采用培养基配制→分装→灭菌冷却→接种→培养→检查→成品工艺。本发明工艺通过人工进行虫草的繁殖和培育，解决了蚕蛹带菌和品种退化的问题，菌丝生长迅速，蚕蛹出草快，成功率高，蛹虫草产量高、色泽好，迎合了市场的需要，通过人工驯化，工厂化生产，为这一名贵中药材的开发利用开辟了广阔前景，对广大生产者带来较高的经济效益。

主权项

一种蛹虫草生产方法，其特征是包括以下方法：培养基配制→分装→灭菌冷却→接种→培养→检查→成品，其中：培养基配制，分固体母种培养基和液体生产种培养基；固体母种培养基配方为：⑴.马铃薯200.0g，葡萄糖20.0g，磷酸二氢钾3.0g，硫酸镁1.5g，维生素B₁ 10.0mg，琼脂20.0g，水1000ml，pH值6.0～7.0；⑵.葡萄糖100.0g，蛋白胨10.0g，酵母膏1.0g，磷酸二氢钾3.0g，硫酸镁1.5g，琼脂20.0g，水1000ml，pH值6.0～7.0；液体生产种培养基配方为：⑴.马铃薯200.0g，蚕蛹粉10.0g，葡萄糖20.0g，磷酸二氢钾3.0g，硫酸镁1.5g，维生素B₁ 50 mg，水1000ml，pH值6.0～7.0；⑵.葡萄糖100.0g，蛋白胨10.0g，酵母膏1.0g，磷酸二氢钾3.0g，硫酸镁1.5g，琼脂20.0g，水 1000ml，pH值6.0～7.0；分装，对于固体母种培养基，按配方称好各种原料，将马铃薯洗净去皮去芽眼，称取200g，切成3～5mm薄片，加水1000ml，文火煮沸20～30分钟，用4层纱布过滤，滤液放回锅内，加入琼脂充分溶化，再依次加入其它成分，搅拌溶解后，加开水补足至1000ml，趁热分装试管，装量为试管的1/4～1/5，塞入胶塞；对于液体生产种培养基，按配方称好各种原料，将马铃薯去皮去芽眼，称取200g，切成3～5mm厚的薄片，与营养基质一起放入锅中，文火煮沸20～30分钟，用8层纱布过滤，滤液用开水补足至1000毫升，再依次加入其它成分，搅拌溶解，然后装入玻璃输液瓶中，液体装量不宜超过容器总容积的2/5，瓶口用聚丙烯塑料薄膜和乳胶圈封口；灭菌冷却，对于固体母种培养基，高压蒸汽灭菌0.11MPa ，保持30分钟，当压力降至“0”时，打开气阀，取出灭菌物，摆成斜面；对于液体生产种培养基，采用高压蒸汽灭菌，高压蒸汽灭菌0.11MPa，保持30分钟，当灭菌器的压力降为零时，开启灭菌器，取出菌种瓶，菌种瓶冷却至室温后方可接种；接种，对于固体母种培养基，将待接种的培养基放入接种箱，同时放入接种工具并进行消毒，同时配合紫外线照射进行空间消毒40分钟；将试管的棉塞齐管或瓶口剪去，用75%酒精棉擦洗外壁，将接种工具在酒精灯火焰上烧灼后，置于清洁的空试管内冷却备用； 将试管母种放在万能夹上，旋转式取下棉塞，右手端起酒精灯，让火焰接触管口，左手将试管慢慢旋转3～4周，然后将试管固定牢；试管口要控制在离酒精火焰10cm范围内进行操作；用杀菌后的备用接种钩，除去母种斜面的尖端部分以及中央的母种块，随后将接种钩放回母种试管；左手持预接种的试管培养基，管口稍向下倾斜，用右手小拇指和无名指、食指和中指持接种钩，从母种试管内钩取直径约2mm大小的种块，放入预接种培养基斜面中央，抽出接种钩，放回母种试管，轻燎右手所持棉塞，旋转式塞入接过菌的试管，由右手放到适当位置，连续完成所有预接种试管；对于液体生产种培养基，在无菌操作条件下，用接种钩从母种斜面中切取1cm2菌面放入液体菌种培养瓶中，迅速用聚丙烯塑料薄膜和乳胶圈封扎瓶口，每支母种可接种10～15瓶液体生产种；培养，种培养温度18～23℃，种培养湿度60～65%，菌种培养光线为黑暗条件，菌种培养空气为环境清新无异味；对于固体母种培养基，固体母种7～10天长满试管；对于液体生产种培养基，液体生产种的生产，主要采用摇床振荡培养，震荡频率依据摇床性能和菌种性质进行适当调节，要求培养的菌种菌球密度大、菌丝挂瓶壁少、培养周期短以及接种后定殖能力强、发菌快；往复式摇床60～70次/分钟，旋转式摇床100～120转/分钟，振荡培养时间为4～6天；没有设备条件的可采用静止培养，静止培养时间为7～10天；检查，培养期间定期检查，一般每天检查2次，及时淘汰染菌或劣势菌种；成品，最后出成品。