[发明专利]一种荚膜多糖的纯化方法

摘要

本发明公开一种荚膜多糖的纯化方法，其步骤主要为：多糖粗制品溶解后经乙醇分级沉淀、膜超滤、十六烷基三甲基溴化铵沉淀、膜超滤、冻干步骤获得纯度较高的荚膜多糖。此过程能将粗制品中含有的培养基、细菌代谢产物及细菌本身含有的蛋白、核酸等杂质去除。方法简便、有效，且不需要使用苯酚、丙酮等对环境污染、伤害人体健康的有机溶剂，能将核酸、蛋白、内毒素等杂质含量控制在符合或优于《中华人民共和国药典》(2010版)或《欧洲药典》(8.0版)的标准范围以内。提取的荚膜多糖适用于疾病的诊断、预防和治疗，尤其适用于细菌多糖或结合疫苗的制备。

主权项

一种荚膜多糖的纯化方法，其特征在于：(1)将荚膜多糖粗制品用注射用水溶解至荚膜多糖粗制品的终浓度为2～20mg/ml，再加入CaCl2和乙醇，使CaCl2的终浓度为0.3～0.8mol/L，乙醇的终浓度为20～35％(ml/ml)，充分搅拌后，静置沉淀6～12小时后离心，收集上清；(2)上清液用孔径为10～100KD膜超滤，得超滤浓缩液1，超滤所用的注射用水体积为上清液体积的10～20倍；(3)向超滤浓缩液1中加入十六烷基三甲基溴化铵至十六烷基三甲基溴化铵的终浓度为0.5～5％(g/ml)，充分搅拌后，静置沉淀6～12小时后离心，收集沉淀；(4)沉淀用浓度为0.05～0.5mol/L盐溶液溶解，离心收集上清，并进行澄清过滤得滤液；(5)滤液用孔径为10～100KD膜超滤浓缩，得超滤浓缩液2，超滤浓缩所用的注射用水体积为上清液体积的5～10倍；(6)超滤浓缩液2经冷冻干燥，即为纯化的荚膜多糖。