[发明专利]一种鸡胚分离培养血清3型鸭甲型肝炎病毒的方法

摘要

本发明涉及一种鸡胚分离培养血清3型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-3)的方法。DHAV-3可致雏鸭发生肝炎，虽然可以通过鸭胚分离和培养病毒，但是通过常规的鸡胚尿囊腔接种的方法很难培养和分离该病毒，本发明采用接种无特定病原(SPF)鸡胚卵黄囊的方法由患病鸭病料中分离出DHAV-3，并能通过SPF鸡胚卵黄囊进行培养和传代，为DHAV-3分离培养、弱毒活疫苗的研制奠定基础。

主权项

一种鸡胚分离培养血清3型鸭甲型肝炎病毒(DHAV‑3)的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)选取经抗血清1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV‑1)阳性血清和抗DHAV‑3阳性血清在鸭胚上进行中和试验和交叉中和试验确诊为DHAV‑3的肝脏组织病料用于鸡胚培养分离病毒；(2)DHAV‑3的组织病料的处理：取少许DHAV‑3的肝脏组织，用灭菌生理盐水做1:5(W/V)左右稀释、研磨、冻融2～3次、离心，取离心上清液经0.22μm滤器除菌过滤；(3)鸡胚接种分离病毒：取上述无菌滤液通过卵黄囊接种途径接种6～8日龄SPF鸡胚，每只胚接种0.2～0.5ml,37℃培养，24h内死胚弃之，连续观察至120h，其间若有鸡胚死亡，随时取出置2～8℃冰箱冷藏数小时或过夜；若无死亡，则于72～96h随机取3枚胚置2～8℃冷藏过夜；(4)鸡胚传代接种：及时取出胚体，研磨成匀浆、离心取上清液经0.22μm除菌过滤，取滤液经卵黄囊接种6～8日龄SPF鸡胚5～10枚，每只胚0.2～0.5ml；盲传5～10代，随着传代次数的增加，鸡胚死亡时间前移，鸡胚死亡率也逐渐达到100％，表明通过鸡胚分离病毒成功，并逐渐适应鸡胚培养。