[发明专利]基于纳米粒子放大技术检测P53蛋白生物传感器的制备方法

摘要

本发明提出了一种基于纳米金粒子质量放大QCM频移信号，检测肿瘤标记物P53蛋白的新方法，该方法通过QCM频移信号的强弱来实现野生型以及混合型P53蛋白的检测，利用抗体与抗原的特异性免疫反应及共识双联DNA对野生型P53蛋白的特异性识别，将能放大QCM频移信号的金纳米粒子固定在QCM芯片上，实现对野生型和混合型p53蛋白的检测，进而可以得到野生型P53蛋白同变异性P53蛋白的比例，判断是否是癌细胞，故能为临床医学和生物分析提供了一种新的分析方法。此方法具有较高的灵敏度和良好的选择性且成本较低，操作简便，能够检测肿瘤标志物P53蛋白，具有广泛的应用前景。在最佳实验条件下，对P53蛋白的检测限为0.1pg/mL。

主权项

基于纳米粒子放大技术检测P53蛋白生物传感器的制备方法，步骤包括：(a)双链DNA修饰的金纳米粒子生物探针的制备：首先制备还原性金纳米粒子，然后将所制备的金纳米粒子与捕获DNA混合，二者通过金‑硫键固定结合，然后将此复合物与捕获DNA互补链混合，两条DNA链完全互补结合形成稳定结构的纳米生物探针；(b)经P53蛋白第二抗体修饰过的金纳米粒子生物探针的制备：用试剂氢氧化钠将步骤(a)中制备的金纳米粒子溶液调节至碱性，然后与P53蛋白第二抗体溶液混合温育反应；(c)金制传感器表面的处理：将在石英晶体微天平仪器测试过程中使用的金片浸入双氧水，氨水和去离子水的混合溶液中处理，然后用去离子水冲洗干净之后放置在仪器当中，持续不断的通入巯基乙胺溶液，然后用磷酸缓冲溶液冲洗金片表面，再持续不断的通入P53蛋白第一抗体溶液，最后用磷酸缓冲溶液冲洗金片；(d)将野生型P53蛋白缓慢持续通入步骤(c)中制备的金制传感器表面，P53蛋白会固定在其表面，然后用磷酸缓冲溶液冲洗掉未固载在金制传感器表面的P53蛋白，再将步骤(a)中的生物探针持续缓慢通过金制传感器表面，记录数据；(e)将野生型与突变型P53蛋白混合液持续缓慢通过步骤(c)中的金制传感器的表面，两种P53蛋白会固定在其表面，然后用磷酸缓冲溶液冲洗掉未固载在金制传感器表面的P53蛋白，再将步骤(b)中产物持续缓慢通过金制传感器表面，记录数据。