[发明专利]产生软骨细胞谱系细胞和/或类软骨组织的方法和组合物有效
| 申请号： | 201480028250.4 | 申请日： | 2014-04-02 |
| 公开（公告）号： | CN105209607B | 公开（公告）日： | 2020-02-07 |
| 发明（设计）人： | 戈登·凯勒;阿普里尔·M·克拉夫特 | 申请（专利权）人： | 大学健康网络 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077;A61K35/32;A61P19/00;C12N5/073;C12Q1/02;G01N33/48;G01N33/50 |
| 代理公司： | 11409 北京德恒律治知识产权代理有限公司 | 代理人： | 章社杲;李伟 |
| 地址： | 加拿大*** | 国省代码： | 加拿大;CA |
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| 摘要： | 一种产生软骨细胞和/或软骨，任选地类关节的非肥大软骨细胞和/或类软骨的组织和/或类肥大软骨细胞的细胞和/或类软骨的组织的方法，所述方法包括：a.采用特化混合物的近轴中胚层培养类原条中胚层群，任选地CD56+，PDGFRα+KDR‑类原条中胚层群，所述混合物包含：i.FGF激动剂；ii.BMP抑制剂；任选地头蛋白，LDN‑193189，Dorsomorphin；和iii.任选地TGFβ抑制剂中的一种或多种，任选地SB431524；和Wnt抑制剂，任选地DKK1，rWP2，或XAV939；以特化表达细胞表面CD73，CD105和/或PDGFR‑β的近轴中胚层群；b.产生软骨细胞前体群，包括：i.将表达CD73，CD105和/或PDGFR‑β的所述近轴中胚层群按照高细胞密度任选地培养于无血清或含血清培养基中；ii.采用TGFβ3激动剂将所述高细胞密度CD73+，CD105+和/或PDGFRβ+近轴中胚层群培养于无血清培养基中以产生高细胞密度Sox9+，胶原蛋白2+软骨细胞前体群；和c.或者i.采用所述TGFβ3激动剂培养所述高细胞密度Sox9+，胶原蛋白2+软骨细胞前体群一段延长的时间以产生类关节的非肥大软骨细胞和/或类软骨的组织；或ii.采用BMP4激动剂培养所述高细胞密度Sox9+胶原蛋白2+软骨细胞前体群一段延长的时间以产生类肥大软骨细胞的细胞和/或类软骨的组织。 | ||
| 搜索关键词： | 产生 软骨 细胞 谱系 组织 方法 组合 | ||
【主权项】：
1.一种用于产生软骨细胞、软骨、类关节的非肥大软骨细胞、类软骨的组织、类肥大软骨细胞的细胞、或类软骨的组织、或它们的组合的方法，所述方法包括：/na.采用诱导混合物的原条培养多能干细胞群，所述诱导混合物的原条包括：/ni.选自活化素A和nodal的活化素激动剂；/nii.选自BMP4、BMP2、BMP6、BMP7和BMP10的BMP4激动剂；和/niii.选自FGF2、FGF4、FGF9、FGF19，FGF21、FGF3、FGF5、FGF6、FGF8a、FGF16、FGF17、FGF18、FGF20和FGF23的FGF激动剂；/n以产生包含CD56+PDGFRα+细胞的类原条中胚层群；/nb.采用特化混合物的近轴中胚层培养类原条中胚层群1、2、3或4天，所述混合物包含：/ni.FGF激动剂；和/nii.BMP抑制剂，其选自头蛋白、LDN-193189、Dorsomorphin、腱蛋白、可溶性BMPRIa、和可溶性BMPRIb，/n以特化包含CD73+CD105+细胞和/或CD73+PDGFRβ+细胞的近轴中胚层群；/nc.产生软骨细胞前体群，包括：/ni.将包含CD73+CD105+和/或CD73+PDGFRβ+细胞的所述近轴中胚层群以高细胞密度培养于无血清或含血清培养基中；/nii.采用TGFβ激动剂将高细胞密度CD73+CD105+和/或CD73+PDGFRβ+近轴中胚层群培养于无血清培养基中以产生高细胞密度Sox9+胶原蛋白2+软骨细胞前体群；和/nd./ni.采用TGFβ激动剂培养高细胞密度Sox9+胶原蛋白2+软骨细胞前体群一段延长的时间以产生类关节的非肥大软骨细胞和/或类软骨的组织；或/nii.采用BMP4激动剂培养高细胞密度Sox9+胶原蛋白2+软骨细胞前体群三周以上的时间以产生类肥大软骨细胞的细胞和/或类软骨的组织。/n
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