[发明专利]一种臧雪莲脱毒组培快繁的方法

摘要

本发明公开了一种臧雪莲脱毒组培快繁的方法，包括如下步骤：选择生长健壮的成熟种子，先用高锰酸钾溶液浸泡12～15小时，取出后保温催芽24～48小时，再经灭菌处理，作为脱毒组培用的外植体，然后经过诱导培养、增殖培养、生根培养、移栽以及病毒检测后，大量繁殖脱毒组培苗、脱毒株芽和脱毒小块根。与现有臧雪莲育苗方法相比，本发明的优点是：接种污染率低、移栽成活率高，品质高。

主权项

一种臧雪莲脱毒组培快繁的方法，其特征在于：按如下步骤进行：1)培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基，各培养基的组分配比为：①基本培养基：选用MS培养基，蔗糖或白糖20～30g/L，琼脂7～9g/L，pH 3.8～4.8；②诱导培养基：MS中添加6‑BA 0.7～1.2mg/L和NAA 0.2～0.35mg/L或MS中添力口6‑BA 2.1～2.4mg/L和IBA 0.15～0.2mg/L；③愈伤组织分化培养基：MS中添加6‑BA 2.8～3.5mg/L和NAA 0.2～0.3mg/L；④增殖培养基：MS中添加6‑BA 0.8～l.0mg/L和NAA O.5～0.8mg/L或MS中添加6‑BA 0.5～1.2mg/L相IBA O.2～0.3mg/L；⑤生根培养基：1/2MS中添加IBA 0.1mg/L和赤霉素0.02～0.03mg/L；2)外植体的选取与灭菌：取臧雪莲的种子，先用高锰酸钾溶液浸泡12～15小时，取出后保温催芽24～48小时，再经灭菌处理，作为脱毒组培用的外植体；3)诱导培养：将步骤2)灭菌处理后的种子接种在诱导培养基上，直接形成无根组培苗或先形成愈伤组织，再将愈伤组织移植至分化培养基诱导出丛芽，形成无根组培苗、珠芽和小块根；4)增殖培养：将步骤3)直接形成的无根组培苗或先形成愈伤组织，再经分化培养基诱导形成的无根组培苗、珠芽和小块根接种在增殖培养基上，诱导出丛芽，形成无根组培苗、珠芽和小块根；5)生根培养：将步骤4)增殖形成的无根组培苗、珠芽和小块根接种在生根培养基中进行生根培养；6)移栽：当步骤5)的生根组培苗生长至2～3cm以上、生根珠芽0.2～0.5cm以上，生根小块根直径0.5～1.0cm以上，移栽基质培养至成苗；7)病毒检测：利用RT‑PCR扩增技术，构建其基因组序列克隆，原核表达制备病毒特异性的抗血清，建立ELISA检测技术进行臧雪莲大豆花叶病毒、芋花叶病毒、马蹄莲花叶病毒的检测。