[发明专利]一种原料乳中乳过氧化物酶的试纸检测方法

摘要

本发明公开了一种原料乳中乳过氧化物酶的试纸检测方法，该方法包括配制反应试剂、试纸反应、检测标准的建立及乳样检测等步骤。本发明的优点在于：检测速度快，最快可在几秒钟完成对乳过氧化物酶的定性检测，3分钟即可定量测定原料乳中的乳过氧化物酶含量，适合乳过氧化物酶的在线检测，并且检测费用低，检测结果准确，最低检出浓度为1-2mg/L，环境要求低，检测操作简便。

主权项

一种原料乳中乳过氧化物酶的试纸检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)配制试纸浸泡液：分别配制pH值为4.0～6.0的0.1mol/L柠檬酸‑0.2mol/L磷酸氢二钠缓冲溶液、浓度为10‑25mmol/L的TMB溶液以及质量分数为0.1％‑1.0％的表面活性剂溶液；将上述配制好的三种溶液按照缓冲溶液：TMB溶液：表面活性剂溶液体积比＝30‑50:0.5‑2:1‑3，优选按照体积比40:1:2混合混匀，即为试纸浸泡液；(2)配制过氧化氢(H₂O₂)溶液：配制浓度为0.5‑1.0mmol/L的H₂O₂溶液；(3)试纸的制作：将裁剪好的滤纸条在步骤(1)配制的试纸浸泡液中，浸泡1～3分钟，完全浸透后，放在平皿上抽真空干燥，制得乳过氧化物酶检测试纸，为提高试纸的稳定性，干燥后的试纸裁去边缘0.5cm，将处理好的显色试纸切割成规格为0.2‑0.8cm×0.2‑0.8cm的试纸片，作为反应区黏接在准备好的PVC胶版上，即制成乳过氧化物酶检测试纸；(4)试纸检测：在步骤(3)中制备好的检测试纸上，先滴加3μL步骤(2)配制好的H₂O₂溶液，再滴加3μL待检测乳样品，反应1‑7min后，目测或使用便携式光电测色仪或其他任何可采集样品颜色信息的仪器，记录试纸颜色信息变化；(5)标准的建立：配制浓度范围在0‑25mg/L的标准乳过氧化物酶样品，按照步骤(4)的方法，采用测定吸光度值或与之等效的方法，制作标准比色卡，或建立反应过程中的颜色变化信息与乳过氧化物酶浓度之间固定的函数关系，作为检测标准；(6)检测：将步骤(4)采集的颜色变化信息与步骤(5)获得的检测标准进行比较，获得所测乳样中的乳过氧化物酶的浓度。