[发明专利]富贵榕组培快繁育苗方法

摘要

本发明公开了一种富贵榕组培快繁育苗方法，其通过外植体培育、外植体诱导、无菌材料驯化与继代扩繁、壮苗生根培养和温室种植五个步骤实现。其选择具有优良母本性状多年生、优良、健壮、无病虫害的富贵榕为母株；各步骤中的MS改良培养基是将标准MS培养基中KNO₃的用量改为950mg.L^‑1，NH₄NO₃的用量改为825mg.L^‑1，并在培育过程中及时剔出纯黄的芽和纯绿的芽。本发明的富贵榕组培快繁育苗方法，育苗成活率98％以上,变异率≤1.0％，在短期内即可获得大量优质苗木。

主权项

1.富贵榕组培快繁育苗方法，其特征在于，通过如下步骤实现：一、外植体培育选择具有优良母本性状多年生、优良、健壮、无病虫害的富贵榕为母株，在生长旺季4‑8月份新芽萌动时先用20‑200PPM的GA3按常规用量进行叶面喷施，隔天一次共3次后，去顶芽，防止水分进入，光强控制在5‑10μmol·m‑2·s‑1，母株停止浇肥；10‑20天后从枝条新长出小芽，待新芽长至2‑5cm且芽叶片有黄绿斑即可剪下1‑2cm作为外植体；二、外植体诱导将采集好的外植体清洁漂洗后，切去全部叶片或切去枝条末梢的0.5‑1.0cm，用消毒液进行消毒后,再用无菌水漂洗，然后切去截面变色部分立即接种于经灭菌好的培养基中进行第一代无菌材料的培养，此培养基采用MS改良培养基，并添加有6‑苄基腺嘌呤(6‑BA)0.1‑5.0mg·L‑1、a‑萘乙酸(NAA)0.1‑0.5mg·L‑1、益培灵0.01‑2.0mg·L‑1、蔗糖20‑35g·L‑1和卡拉胶6.5g·L‑1，调整pH值为5.7‑6.3；培养条件：温度26±1℃，光照14±1H/D,光强10‑20μmol·m‑2·s‑1，湿度40‑65％，培养周期35±3D；三、无菌材料驯化与继代扩繁(一)无菌材料的驯化第一代无菌材料培养后当新芽叶片展开，待芽长到10mm时从芽基部切除，保留顶芽5‑8mm，如有丛生芽按1‑3芽/团进行方向性切割，只保留芽叶片黄绿相间的芽，纯黄的芽和纯绿的芽淘汰；将切割好的芽/团接种于经灭菌好的培养基中，此培养基采用MS改良培养基，并添加维生素C 30‑100mg·L‑1、6‑苄基腺嘌呤(6‑BA)0.1‑3.0mg·L‑1、氯吡脲(CPPU)0.1‑2.0mg·L‑1、萘乙酸(NAA)0.1‑0.4mg·L‑1、蔗糖20‑30g·L‑1和卡拉胶6.5g·L‑1，调整pH值为5.7‑6.3；培养条件：温度26±1℃，光照14±1H/D,光强35‑70μmol·m‑2·s‑1，湿度40‑65％，培养周期30±3D；经上述4‑5次驯化培养后，即完成驯化进入扩繁阶段；(二)无菌材料的继代扩繁进入扩繁阶段的材料长成6‑10芽/团，按2‑3芽/团切割，若团块芽高度大于10mm，则去顶留5‑8mm；只保留芽叶片黄绿相间的芽，纯黄的芽和纯绿的芽淘汰，将切割好的芽团接种于培养基中，此培养基采用MS改良培养基，并添加6‑苄基腺嘌呤(6‑BA)0.1‑3.0mg·L‑1、氯吡脲(CPPU)0.01‑0.1.0mg·L‑1、萘乙酸(NAA)0.01‑0.3mg·L‑1、蔗糖20‑35g·L‑1和卡拉胶6.5g·L‑1，调整pH值为5.7‑6.3，扩繁倍率3.0‑6.0；培养条件：温度26±1℃，光照14±1H/D,光强35‑70μmol·m‑2·s‑1，湿度40‑65％，培养周期30±5D；四、壮苗生根培养(一)壮苗培养将经扩繁培养后的芽团按3‑4芽/团方向性切割后，接种到壮苗培养基中，壮苗培养基采用MS改良培养基，并添加萘乙酸(NAA)0.1‑1g·L‑1、活性炭0.5g·L‑1、蔗糖15‑35g·L‑1和卡拉胶6.5g·L‑1，调整pH值为5.7‑6.3；培养条件：温度24±1℃，光照14±1H/D，光强60‑120μmol·m‑2·s‑1，湿度40‑65％，培养周期25±3D；(二)生根培养当团块上的芽长度达15‑25mm、茎粗度≥1mm、具有3片完整叶时，按单芽进行切割，切下来的单芽接种到生根培养基中，生根培养基采用MS改良培养基，并添加吲哚丁酸(IBA)1‑3mg·L‑1、萘乙酸(NAA)0.01‑0.5mg·L‑1、活性炭0.1‑1g·L‑1、蔗糖15‑35g·L‑1和卡拉胶6.5g·L‑1，调整pH值为5.7‑6.3；培养条件：温度23±1℃，光照14±1H/D，光强70‑150μmol·m‑2·s‑1，湿度40‑65％，培养周期15±2D；生根培养7‑10D后长根，2周后长根率达99.5％，根数2‑8条，植株高度25‑55mm，植物株健壮、叶片黄绿相间即可用于种植；五、温室种植将生根苗放置温室炼苗，炼苗场所要求光强80‑160μmol·m‑2·s‑1，湿度60‑80％，温度20‑30℃，炼苗3‑7天后取出苗，去除叶片纯黄的苗和叶片纯绿的苗,留下的苗将其上的培养基清洗干净并消毒后即可种植，基质采用体积比为3‑5:0.5‑1.5的泥炭土和珍珠岩的混合物，种植后做好遮阴、保湿，控制温度22‑30℃，湿度80‑95％，种植4‑8个月，得到株高45‑70mm，具有4片以上黄绿相间的完整植株，达到出货标准；上述各步骤中的MS改良培养基是将标准MS培养基中KNO3的用量改为950mg.L‑1，NH4NO3的用量改为825mg.L‑1。