[发明专利]一种中品肝素钠的提取方法

摘要

本发明具体涉及一种中品肝素钠的提取方法。该中品肝素钠的提取方法，包括：溶解；酶解；去除蛋白；去除钙离子；沉淀；树脂吸附；洗脱；一次氧化；过滤、沉淀；二次氧化；过滤、沉淀；脱水、烘干；称量、包装。采用过氧化氢二次氧化法制备中品肝素钠，确立了酶解结合树脂吸附和氧化法制备肝素钠的新工艺，客服了粗品肝素钠纯化过程中残留杂蛋白难以去除的缺点；在粗品肝素钠溶液中加入胰蛋白酶对杂蛋白进行溶解，再结合树脂吸附及氧化除杂，提高了中品肝素钠的效价和收率。

主权项

一种中品肝素钠的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）溶解：按照3%的肠衣盐水：粗品肝素钠的亿单位10‑15:1的比例，将粗品肝素钠溶于3%的肠衣盐水中，搅拌升温至35‑40℃，反应；（2）酶解：用NaOH调节溶液至pH 7.5‑8.0，按16g/亿单位的比例向反应液中加入胰酶，控制温度在38‑42℃反应；（3）去除蛋白：调pH 至8.5，升温至55‑65℃，按肝素钠质量的20‑30%加入氯化钙，反应，继续升温至90‑95℃，停止加热，然后降温至35‑45℃，进行离心；（4）去除钙离子：保持溶液温度35‑45℃，加入与氯化钙等量的无水碳酸钠，反应，过滤，收集滤液；（5）沉淀：用盐酸调pH至7.0‑7.5，用食品级乙醇进行沉淀，控制上层乙醇度数38‑42度，静置，上层待回收乙醇抽入复沉罐中，收集下层沉淀；（6）树脂吸附：按照10%‑15%浓度加水溶解，溶解后，按溶液体积的0.06‑1%加入亚硫酸钠，调节pH7.0‑7.5，温度55‑60℃，按照肝素钠亿单位：树脂体积比1:10的比例加入树脂进行吸附，吸附，吸附结束后，过滤，收集树脂；（7）洗脱：将所收集到的树脂，用饱和肠衣盐水：树脂1.2‑1.5:1的比例进行洗脱，按溶液体积的0.06‑1%加入亚硫酸钠，调节pH7.0‑7.5，温度55‑60℃，洗脱，洗脱结束后，收集洗脱液；（8）合并、沉淀：将收集到的洗脱液合并，用食品级乙醇进行沉淀，上层乙醇度数38‑42度，静置，上层待回收乙醇抽入复沉罐中，收集下层沉淀；（9）一次氧化：将步骤收集到的沉淀，用2%的肠衣盐水按10%‑15%的浓度进行溶解，溶解后，调节pH10.5‑11.0，温度25‑30℃，加入H₂O₂进行氧化；（10）过滤、沉淀：将溶液过滤，收集过滤液，用盐酸调pH7.0‑7.5，用食品级乙醇进行沉淀，控制上层乙醇度数38‑42度，静置，上层待回收乙醇抽入复沉罐中，收集下层沉淀；（11）二次氧化：将步骤（10）收集到的沉淀，重复步骤（9）的操作，进行二次氧化；（12）过滤、沉淀：重复步骤（10）的操作，将溶液进行过滤、沉淀；（13）脱水、烘干：将步骤（12）收集到的沉淀，用95‑100度乙醇进行脱水，脱水后的沉淀用双锥进行烘干，即得中品肝素钠；（14）称量、包装：将中品肝素钠，进行称量，按规格要求，将中品肝素钠进行包装得成品。