[发明专利]南方大口鲶肌肉细胞系的构建方法

摘要

本发明公开了一种南方大口鲶肌细胞系的构建方法，它是以南方大口鲶背肌为材料，采用组织块贴壁法启动原代培养，在含胎牛血清、表皮生长因子和成纤维生长因子的MEM培养液中培养，采用胰蛋白酶消化法进行传代培养。由本发明构建的南方大口鲶肌细胞系，目前已传至第56代，其工艺科学合理，且细胞系未经过任何病毒或癌基因转染，可作为环境毒理学研究环境污染的模型，对水体中存在的各种环境污染物进行污染监测和安全性评价。

主权项

一种南方大口鲶肌细胞系的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：1)首先将体质健康的南方大口鲶置于含有浓度为1000单位/mL的青霉素和链霉素的水溶液中饲养36～60h，2)取出南方大口鲶置于体积分数为75％的酒精中浸泡1～2min后，在超净工作台内无菌剪下背肌，并将背肌置于AIM培养基中浸泡2～3h，其中，25～35min更换一次AIM培养基，3)将步骤2)浸泡的背肌用眼科剪剪碎成1mm³的小块，然后用AIM培养基冲洗2～3次，收集20～25个组织小块贴到25cm²的原代细胞培养瓶底部，在室温下干贴2～4h后，将培养瓶侧放半小时后，吸出过多的培养液，每个培养瓶中缓慢注入4～6mL升的南方大口鲶肌细胞增殖培养液，在22～25℃生化培养箱中培养，观察并记录培养情况，每隔2～3天用移液管吸出旧的培养基，并离心，然后吸出2～3mL的上清液再加上2～3mL的南方大口鲶肌细胞增殖培养液；即得到南方大口鲶肌细胞系。